TLR4-NF-KB信号途径在糖尿病促进牙周病发生机理中的作用

牙周病与糖尿病相互影响促进了彼此的发生与发展。已知在牙周病的发生过程中，人牙周膜细胞（hPDLP）的天然免疫，特别是TLR4可以通过活化NF-κB信号途径，促进细胞炎症反应增强乃至细胞凋亡，是牙周病发生的主要机制。但是，在糖尿病促进牙周病的发生中TLR4-NF-κB信号途径的作用尚不清楚。本课题通过细胞培养与动物实验相结合，首先分析高糖条件下对hPDLP的TLR4活性、NF-κB信号通路活性以及炎症反应的变化，并通过激活/抑制TLR4，检测高糖对hPDLP炎症反应的影响，明确TLR4的作用，进而通过抑制/激活NF-κB信号通路检测高糖条件下对hPDLP炎症反应的影响及其是否与TLR4的作用一致，明确TLR4是否通过NF-κB信号途径发挥作用。最后，在高糖诱导牙周病动物模型中，验证TLR4-NF-κB信号途径在糖尿病促进牙周病发生中的作用，以从分子信号传导水平研究糖尿病促进牙周病的发病机理。

牙周病与糖尿病之间相互影响和促进已被广泛认同，但其作用机理仍然未有定论。课题组在前期研究得基础上认为该相互作用可能与NF kappa B信号通路有关，并以此为研究中心进行相关实验。体外实验部分：通过Q-PCR以及ELISA检测方法，我们研究发现高糖培养环境对人牙周膜细胞炎性因子表达有明显的促进作用。利用MTT以及流式细胞仪检测技术发现高糖环境对细胞的增殖，细胞的凋亡也有着一定的影响。接下来，免疫荧光检测P65在细胞中的分布，结果表明在高糖作用下P65更趋向于转移入核。由于P65是NF kappa B信号通路中的关键信号，我们推测高糖环境对细胞炎性因子表达的影响可能与NF kappa B信号通路的激活与否具有一定的相关性。通过加入该信号通路的激发组与抑制组，结果更进一步地表明我们的实验模型与NF kappa B信号通路的密切关系。体内实验部分：利用STZ造糖尿病鼠模型，发现糖尿病鼠的龈沟液中IL-1β、TNFα、LPS等炎性因子较正常对照组明显高表达，这进一步证明了我们的推测。该实验从糖尿病患者是牙周病的高发及高危人群的临床现象出发，以糖尿病鼠、人牙周膜细胞为实验模型，将高糖培养环境、炎性因子表达、NF kappa B信号通路三者联系起来，为后续机制的进一步研究以及治疗方案提供参考。