卵巢癌肿瘤源性CD73免疫调控机制及抗肿瘤新靶点研究

我们最近的研究结果表明卵巢癌肿瘤源性CD73通过外生-5-核苷酸酶的生物活性抑制了抗肿瘤T细胞介导的肿瘤治疗。本项目拟在此结果基础上更深一步去明确肿瘤源性CD73的免疫保护机制。由于内源的抗肿瘤免疫即使被修复，效力也不足够充分而且作用短暂，CD73为靶点的癌症疗法可能达不到最佳效果，除非能和其他免疫疗法有效相结合，例如T细胞移植或树突状细胞疫苗。因此，本项目最后将研究用结合了树突状细胞疫苗的小分子抑制剂APCP或抗CD73单克隆抗体来抑制CD73的治疗手段，为CD73相关的抗肿瘤药物研制与开发提供理论和试验依据,从而最终确定CD73靶点疗法的临床前景。

最近我们证实肿瘤源性的CD73发挥外生-5-核苷酸酶功能并联合CD39（外生ATP酶）以ATP生成胞外腺苷， 进而抑制了抗肿瘤T细胞，促进了肿瘤的生长。然而，目前对CD73发挥肿瘤免疫调控的分子机制的认识还不全面。通过本基金项目，我们建立了有A2AB- 或A2BR-缺陷的抗原特异性T细胞转基因小鼠。我们的结果证明由肿瘤CD73生成的腺苷能通过A2AR和A2BR通路抑制了肿瘤反应T细胞的免疫应答，从而促进肿瘤生长。我们发现了单独使用DC疫苗不能很明显的增加卵巢癌荷瘤小鼠的整体存活率。由于CD73在肿瘤细胞上被高表达从而损伤了抗肿瘤的免疫，我们探讨了以肿瘤CD73为靶和DC疫苗结合，是否能提升疗法的效率，我们证明了APCP或TY/23和DC疫苗联合使用对内源性抗原特异性抗肿瘤T细胞的免疫功能增强有协同效应。为了进一步探索抗肿瘤T细胞的记忆应答，我们发现使用APCP或抗CD73单克隆抗体促进了DC疫苗诱导的记忆T细胞分化成中央型（TCM）和/或效应（TEM）记忆T细胞亚群，我们最近的研究已经表明，TCM在消灭已经成形的肿瘤中更加有效。并且DC疫苗诱导的TEM和TCM CD8+T细胞在CD73沉默时仍保持了对肿瘤抗原的长时间应答。最后，APCP或抗CD73单克隆抗体处理的DC免疫显著减少肿瘤负荷，并且增加了荷瘤小鼠的存活时间。此外，我们检测了卵巢癌患者组织和外周血中髓源抑制性细胞（MDSC）的含量及其表面CD73和CD39的表达，发现MDSC表面CD73和CD39较健康人高表达。我们进行了体外实验，用CD73和CD39抑制剂阻断MDSC表面二者的表达，发现MDSC能够通过CD73和CD39生成的腺苷对T细胞功能产生抑制作用。 我们进一步证明了肿瘤细胞产生的TGF-β能够诱导CD73和CD39从而抑制T细胞和NK细胞的功能。并且CD73和CD39在MDSC的高表达与肿瘤恶性程度，预后以及化疗相应程度紧密相关。此结果在肺癌患者也得到证实。