肝癌细胞系中NS5ATP9调控靶基因的筛选及验证

丙型肝炎病毒（HCV）可引起慢性肝炎、肝硬化及肝细胞肝癌,但其发病机制不清。我们前期实验发现NS5ATP9是HCV非结构蛋白 5A（NS5A）的反式激活基因，可能与病毒性肝炎及肝癌的发生发展有关，并对NS5ATP9启动子和其上游调控基因进行了研究。本实验拟通过染色质免疫共沉淀结合启动子芯片（CHIP-on-chip）技术对肝癌细胞系中NS5ATP9下游调控靶基因进行筛选；采用RNA干扰技术下调NS5ATP9在肝癌细胞系中的表达，应用微阵列-比较基因组杂交（array-based Comparative Genomic Hybridization,aCGH芯片）技术筛选相关调控基因；并综合两次筛选结果，通过双荧光素酶报告基因检测系统对筛选出的基因进行验证，旨在探讨NS5ATP9的调控通路，为揭示其在肝脏疾病中的作用提供有益的线索。

NS5ATP9与肿瘤的发生、发展有关，但是对其在肝癌中的功能却知之甚少。我们发现NS5ATP9在肝癌中高表达，定位于细胞核，可能是一个转录因子。我们采用aCGH芯片技术检测到NS5ATP9表达情况不同时染色体基因拷贝数的变化情况，发现NS5ATP9的表达可以改变细胞的染色体稳定性，影响一些与癌症进展有关的基因。另外，NS5ATP9 mRNA 在肝癌患者的外周单个核细胞（PBMC）中表达也存在上调，并与患者的预后相关。通过以上研究，发现了NS5ATP9作为肝癌肿瘤标志物可能性，为进一步了解NS5ATP9基因的功能和将其应用于临床作为肝癌早期无创诊断标志物提供有益的线索；并且通过构建NS5ATP9交互网络图，对阐明其在肝癌中的作用机制提供有益的线索，为肿瘤基因治疗提供新的靶点。