益肺清化颗粒对血管生成因子及VEGF/KDR和Angiopoietins /Tie2信号传导通路的调控作用研究

据中医理论总结肺癌转移复发的病机为"气阴两虚，痰毒流注"，治以"益气养阴，化痰解毒"。据此治则组成益肺清化颗粒，大量临床及实验研究证实该方对中晚期肺癌具有良好疗效。肿瘤血管生成在肺癌生长、转移、定植、复发中起决定性作用，血管生成调节因子在肿瘤血管生成中起重要作用。选取对肿瘤血管生成起主要作用的VEGF、bFGF、AS、ES 和VEGF/KDR和Angiopoietins /Tie2信号传导等指标，应用Lewis肺癌小鼠模型，测定移植瘤组织微血管密度、及其上述指标蛋白含量及基因表达的影响。采用角膜微囊实验、海绵-基质胶实验定量测定血管生成数量。选用内皮细胞、人肺巨细胞癌细胞系PG细胞，应用血清药理学方法研究益肺清化颗粒通过调控上述血管生成调节因子及其信号传导途径，抑制血管内皮细胞生长、迁移、促进其凋亡抗肿瘤血管生成，抑制肺癌转移复发的作用机理。明确中医药抗肺癌转移复发的作用靶点及机理。

不同剂量益肺清化颗粒对Lewis肺癌小鼠随着给药剂量的增加，对小鼠模型抑瘤作用增强，且与吉非替尼有一定的协同作用。不同剂量益肺清化颗粒对Lewis肺癌小鼠移植瘤MVD的作用随着给药剂量的增加而减少，且与吉非替尼有一定的协同作用。不同剂量益肺清化颗粒对肿瘤血管生成过程中促进因子VEGF及其受体KDR、Ang-2及其受体Tie-2等多种指标从蛋白到基因水平都有一定的抑制作用，有一定的量效关系，且与吉非替尼有一定的协同作用。不同剂量益肺清化颗粒对肿瘤血管生成过程中的抑制因子AS、ES有一定的促进作用，与模型组相比有不同程度的统计学意义，有一定的量效关系。. 高剂量益肺清化颗粒含药血清对内皮细胞和PG细胞的增殖有抑制作用。内皮细胞和PG细胞早期凋亡率和坏死率：益肺清化颗粒含药血清随剂量增加作用逐渐增强，并呈现显著的剂量相关性。Gefitinib和益肺清化颗粒含药血清联合用药后，增效作用明显。各浓度组益肺清化颗粒含药血清和Gefitinib均对HVUEC的迁移有抑制作用，并呈现显著的剂量相关性，30uM的Gefitinib和20%的含药血清联用后，有明显的增效作用。各组浓度益肺清化颗粒含药血清和Gefitinib对PG的迁移和侵袭有显著的抑制作用，并呈现显著的剂量相关性。40µM的Gefitinib和20%的含药血清联用后，有明显的增效作用。含药血清和Gefitinib对HUVEC VEGF、KDR、Tie-2均有明显的抑制作用。Gefitinib和20%的含药血清联合应用有明显的增效作用。含药血清和Gefitinib对PG细胞VEGF、KDR、Ang-2均有明显的抑制作用。Gefitinib和20%的含药血清联合应用有明显的增效作用。含药血清和Gefitinib单独使用对PG细胞的Tie-2表达水平没明显影响，联合应用后，有明显的抑制作用。含药血清和Gefitinib对HUVEC和PG细胞的VEGF，KDR，Ang-2的RNA表达有抑制作用，含药血清和Gefitinib对PG细胞的Ang-2的RNA表达有抑制作用抑制作用随着含药血清的浓度增加而升高；而对ES的RNA表达有促进作用，且随着含药血清的浓度增加而升高。含药血清和Gefitinib联用后对PG细胞VEGF，KDR和ES的mRNA表达水平增效作用不明显。各含药血清对bFGF、AS的RNA表达影响不明显。