利用敏感生物活性指标研究中药在Caco-2细胞模型中的转运特征与机制

Caco-2细胞模型是国际公认用于研究口服药物吸收特性及转运机制最好的体外模型。由于其与体内良好的相关性，已被越来越多地用于研究中药的吸收转运。但之前多采用HPLC、HPLC-MS等经典化学测定方法进行成分检测，并通过计算转运参数并判断该测定成分的吸收特性与机制。中药成分复杂多样，有效成分谱不明。这种以"点"（指标性成分）代"面"（有效成分谱）的研究所存在的弊病是显而易见的。它严重影响了该模型在口服中药吸收转运研究中的应用价值。本课题在课题组上个基金的基础上，从侦筛能代表多成分中药的敏感生物活性指标为起点，绕开因中药有效成分谱不明所致的研究瓶颈，通过对过膜生物活性的检测，从量效曲线求得中药的转运量，继而计算出"活性"Papp及ER等参数，以此来反映基于该生物活性的特定成分群的体外转运特征及机制，并与化学测定法的研究结果进行比对。最终建立符合中药特点的体外吸收转运研究新模式。

Caco-2细胞模型是国际公认用于研究口服药物吸收特性及转运机制最好的体外模型。由于其与体内良好的相关性，已被越来越多地用于研究中药的吸收转运。但之前多采用HPLC、HPLC-MS等经典化学测定方法进行成分检测，并通过计算转运参数并判断该测定成分的吸收特性与机制。中药成分复杂多样，有效成分谱不明。这种以“点”（指标性成分）代“面”（有效成分谱）的研究所存在的弊病是显而易见的。它严重影响了该模型在口服中药吸收转运研究中的应用价值。本课题对来源于肉苁蓉，丹参、桑叶，甘草，厚朴，赤芍，苍术，全蝎十余种不同中药提取物的生物活性进行筛查与侦测，最终找到了既可代表多成分，又与Caco-2细胞单层体系兼容，且灵敏度达到了过膜液的活性能从提取物标曲上计算转运量的4种中药，5种提取物。它们是：肉苁蓉苯乙醇苷类、桑叶水提部位，厚朴酚酸部位及丹参总醌与水提部位。课题绕开因中药有效成分谱不明所致的研究瓶颈，通过对这5种中药提取物过Caco-2细胞单层膜生物活性的检测，从提取物活性的量效曲线求得受试中药提取物，而非某一成分的转运量，继而计算出 “活性”Papp及ER等参数，以此来反映基于该生物活性的特定成分群的体外转运特征及机制。结果显示，5种提取物均属被动转运，除厚朴酚酸部位及丹参水提物吸收良好或一般外，其余3种属吸收不良（按Papp值推算，属生物利用度低于20％），双向转运显示，5种中药提取物中，桑叶水提物，丹参总醌类具有外排特征，这可能与其吸收不良有关。为了进一步说明这种“面”测定的方法的科学性，我们还对占肉苁蓉苯乙醇苷总量78.4%三种成分Echinacoside (EC)，Acteoside (AC)，Isoacteoside (IS)与其提取物进行了对比研究(“点测定”)，结果显示三种成分呈现出的转运特征(被动转运，吸收不良，无外排等)均与提取物相同。通过与经典的化学测定法的对等研究的比对。我们认为采用能代表提取物多成分的生物活性(即多成分的“面”)，通过该提取物活性的标曲计算提取物，而非某单一成分的转运量，以此判断与该生物活性相关的成分群(“面”)体外转运特征是可行的。这种新的研究思路与方法符合多成分中药的特征，是研究中药提取物体外吸收转运的新模式。