基于TLR-NF-κB通路探讨如意金黄散干预促MRSA感染慢性创面逆转耐药及炎症控制的机制研究

Chronic wounds induced by multidrug resistant bacteria infection was difficult to heal, while a large number of external antibiotics often lead to bacterial mutation, accelerating the process of bacterial resistance. Previous studies had confirmed that guided by the theory called “hoop circumference”in surgery of traditional Chinese medicine with tincture can promote abscess with Staphylococcus aureus infection limitations and control the spread of inflammation from strengthening Zhengqi then make balance of bacteriostasis without sterilization and infection control. Based on this study, this method was further applied to the treatment of chronic wounds infected by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA),to study the relationship between hoop therapy and infection-related signaling pathways in reversing bacterial resistance and based on the current efficacy. In this study, chronic wound model of MRSA infection in rats was established, and the effects of Ruyi Jinhuangsan Tincture on wound healing were compared with 75% alcohol and Mopirocin, compared with bacteriological and immunohistochemical detection, using " TLR -NF-κB pathway " of the promoter of TNF- α, Toll like receptor (TLR), a negative regulator of beta -arrestin, regulator NF- κB p65, effector IL-6, reverse IL-10 cell effector factor as target, to investigate local bacteriostasis of Ruyi Jinhuangsan Tincture on chronic wounds with MRSA infection and its mechanism.

多重耐药菌导致的慢性感染创面缠绵难愈，如果大量外用抗生素往往导致细菌变异，加速细菌耐药进程。前期研究证实，在中医外科学护场理论指导下的酊剂箍围法能够通过对局部正气的强化，达到抑菌而不杀菌的平衡作用以及控制感染等作用，促进金葡菌感染脓肿局限，控制炎症扩散。基于此本研究进一步将此法应用于甲氧西林耐药金葡菌 (MRSA)感染慢性创面的治疗，研究其对于逆转细菌耐药以及在现有疗效基础上箍围法与感染相关信号通路的关系。本研究通过制作大鼠MRSA感染慢性创面模型，以如意金黄散酊剂箍围与外用75%酒精、外用莫匹罗星进行对照，结合细菌学及免疫组织检测，以TLR-NF-κB通路的启动子TNF-α、Toll 样受体、负调节因子β-arrestin、调控子NF-κB p65、效应子IL-6、反向效应子IL-10细胞因子等为目标，探讨如意金黄散酊剂箍围干预对MRSA感染慢性创面局部抑菌及对于相关因子的作用机制。

本项目是基于TLR-NF-κB通路探讨如意金黄散干预促MRSA感染慢性创面逆转耐药及炎症控制的机制研究。既往研究表明，慢性感染性创面中金黄色葡萄球菌检出率最高，而具有多重耐药性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)占金黄色葡萄球菌的比例高达76.09% ，且仍处于不断上升趋势。由于MRSA存活力较强、多重耐药、进入体循环感染后致死率高，给治疗和院感控制带来了较大困难。目前临床治疗MRSA感染创面以抗生素外用为主，但耐药菌变异速度快，耐药时间不断缩短，进一步造成了抗生素的大范围滥用的恶性循环。故本项目探讨研究金黄散酊剂箍围控制慢性MRSA感染难愈性创口愈合的可能性，减少创面抗生素外用，降低耐药菌产生，尝试为慢性MRSA感染难愈性创口愈合提供新的解决思路。通过体外实验，采用不同外用药干预大鼠感染性创面，将生理盐水组、酒精组、莫匹罗星组、金黄散酊组四组在不同时期的大鼠创面面积、MH羊血琼脂培养平板的菌落计数、MRSA 显色培养基平板的菌落计数、MRSA细菌毒力因子检测等控制变量下进行比较，观察如意金黄散酊剂箍围对于创面愈合情况及局部多重耐药菌抑制情况。实验表明：金黄散酊组虽不如莫匹罗星针对MRSA的专一性好，但在治疗包含MRSA的综合性感染创面具有优势。且通过大鼠创面面积、细菌毒力说明MRSA的感染毒力和感染指标无明显改变时，莫匹罗星组和金黄散酊组创面恢复时间的影响并未有明显统计学差异，说明二者在临床应用时疗效基本相当。科学意义：1.在外科领域创面感染时，不必过分强调MRSA的威胁性，因其感染与否不会过分影响创面的愈合速度，故临床无需过度治疗，不然可能会进一步提高耐药性。2.如意金黄散酊剂在治疗临床包含MRSA的多重细菌感染创面时，效果不弱于莫匹罗星。从中医角度来说，如意金黄散着重于整体治疗，“护场”箍围约束创面，进而影响感染创口的细菌生存环境，而非单一的线性治疗思路。综上所述，通过本次项目研究，可以降低在外科领域因盲目过度应用抗生素导致MRSA菌进一步产生耐药可能性，同时为临床用金黄散酊剂治疗含有MRSA混合菌感染的外科创面提供实验依据。对于提高人体正气，促进创面自愈能力，注意院内消毒，防止MRSA菌从接触传播、呼吸道传播等途径进入内循环感染亦有一定帮助。