肝脂肪酸结合蛋白在乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌中的作用及机制

肝脂肪变性和信号脂质在肝细胞癌变进程中的作用近来受到极大关注，研究表明肝脂肪变性与肝细胞癌发生有一定关系，而信号脂质可传递一系列细胞增殖和凋亡信号。肝脂肪酸结合蛋白（FABP）作为重要的信号脂质在肝细胞内脂肪转运和代谢过程以及一些重要的信号传导通路中有重要的作用。有研究证实，乙肝病毒HBx蛋白可诱导肝脂肪代谢异常和部分信号脂质发生改变。在本课题中，我们将研究ＨＢｘ转染人肝癌细胞株HepG2细胞后，对FABP表达的影响及其机制，FABP对下游相关肿瘤基因的调控作用；通过对转染HBx肝癌细胞和FABP RNA干扰肝癌细胞脂肪含量的检测，了解HBx和FABP对肝癌细胞脂肪代谢的影响；同时，通过对肝癌患者血清和肝组织FABP的检测，进一步证实FABP在肝癌发生中的作用。以上研究将为进一步了解HBV感染后肝细胞癌变的分子机制提供新的视野。

背景&目的：慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染被认为是肝细胞癌发生发展的主要原因,其中乙肝病毒X蛋白(HBx)在其中扮演着重要的角色。前期的研究表明肝脂肪变性是肝细胞癌的一个重要风险因素，HBx可诱导肝脂肪变性。而肝脏脂肪酸结合蛋白(FABP)是肝细胞中脂质信号传导及脂代谢中重要的脂质信号转导蛋白,而HBx与FABP的相关性及FABP在肝细胞癌发生发展的作用及其机制尚未明了。在本研究中,我们研究了HBx和FABP的相关性及FABP在乙肝病毒相关的肝癌中的作用机理。方法:收集335例已进行HE染色的HBV相关性肝细胞癌癌组织切片和1181例慢性乙型肝炎肝活检组织切片，观察肝脂肪变性的发生率。采用免疫组化方法，比较FABP在96例肝细胞癌癌组织和68例慢性乙型肝炎肝组织中的表达情况。在体外实验中，我们将编码ＨＢｘ质粒转染人肝癌细胞株HepG2细胞，用蛋白免疫印迹法检测FABP表达。随后，转染FABP RNAi质粒阻止FABP的表达，用油红O染色比较转染L-FABP沉默质粒及未转染细胞内脂质变性的差异，MTT 及DAPI染色检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果：HBV相关性肝细胞癌癌组织肝脂肪变性发生率明显高于慢性乙型肝炎肝组织（60%对39.04%，p<0.01）； FABP在肝细胞癌癌组织中的表达显著高于慢性乙型肝炎肝组织（75%对20.6%，p<0.01）。体外实验：免疫蛋白印迹结果显示转染HBX的细胞L-FABP的表达高于未转染细胞，油红O染色结果显示转染FABP RNAi质粒细胞内脂滴生成明显少于未转染细胞，MTT及DAPI染色显示转染FABP RNAi质粒的细胞增殖能力显著低于对照组。流式细胞术结果显示，相比于对照组， FABP基因沉默后细胞周期缩短，细胞凋亡率升高。结论：我们的研究结果显示，HBX可以上调FABP的表达，FABP在 促进脂肪的生成的同时，可通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡的途径影响肝细胞癌的发生发展。