舒张血管物质对耳蜗血管纹毛细血管周细胞作用机制的研究

Had the material to indicate the internal ear microcycle also participates in many important physiological and the pathology physiological processes except the supply internal ear blood,but how does the stria vascularis capillary cells to maintain in the cochlea in high K+ and the endocochlear potential plays the role? How vasodilative medicine to adjust this function not clearly still.This project intends to be the guinea pig stria vascularis capillary segment in vitro specimens following studies：1) The application of electrophysiological technology to study the capillary cells of the stria vascularis has electrophysiological properties, on the cell membrane there are those types of potassium channels. 2) The application of immunohistochemical techniques, Western-blot technique, and Real-time PCR to detect several vasodilator (substance P, prostacyclin, bradykinin, ATP and vasoactive intestinal peptide) receptors in the vascular pattern capillary cell expression.3) To study the effect and ionic mechanism of above-mentioned vasodilator on the capillary pericyte of the stria vascularis by electrophysiological technology, as well as between them adjusts mutually the relations,reveals the function activity the rule of the stria vascularis capillary pericyte.In order to clarify the capillary pericyte of the stria vascularis how to maintain the stria vascular internal environment stability and the function in the cochlea provides the experimental evidence; to provide the new theory basis for the vasodilator prevention and treatment metabolic presbycusis.

已知内耳微循环除供应内耳血液还参与许多重要的生理和病理生理过程，但血管纹毛细血管周细胞对维持耳蜗内高钾和耳蜗内电位如何发挥作用？舒血管物质如何调节此作用？目前尚不清楚。本课题拟在豚鼠耳蜗血管纹毛细血管标本上研究：1）电生理技术观察血管纹毛细血管周细胞具有的电生理学特性，周细胞膜上钾离子通道的类型。2）免疫组化技术、Western-blot技术和Real-time PCR技术检测几种舒血管物质（P物质、前列环素、缓激肽、ATP和血管活性肠肽）相应受体在血管纹毛细血管周细胞的表达。3）应用电生理技术研究上述舒张血管物质对血管纹毛细血管周细胞的作用和离子机制，以及它们之间相互调节的关系，明确舒张血管物质调节血管纹毛细血管周细胞功能活动的规律。为阐明血管纹毛细血管周细胞对维持耳蜗内环境稳态和功能的作用提供实验证据；为舒张血管物质防治代谢型老年聋提供新的理论依据。

本课题是以豚鼠耳蜗血管纹周细胞为研究对象，探讨血管纹周细胞对维持耳蜗内环境稳态和功能的作用，所获主要研究成果如下：1）周细胞的鉴定：周细胞核大浆少，胞浆伸出大的细胞突起与微血管长轴平行，突起逐渐分枝变细，末梢环绕微血管的内皮细胞，符合全细胞膜片钳技术研究要求的周细胞；2）豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞的电生理特性：周细胞和平滑肌细胞电生理学特性相似，且其电流密度具有电压依赖性。3）豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞上的钾离子通道类型：豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞的外向电流I/V关系呈明显的外向整流特性，且均可被IBTX和4-AP部分抑制。证明周细胞膜上存在有BKCa和Kv通道，可能参与周细胞静息膜电位的形成及调节微血管的血流。4）螺旋神经节神经元（SGN）的电生理特性：SGN外向电流成分为BK通 道及电压依赖性钾通道。缺氧对SGN外向电流具有电压依赖性增强作用。增强的外向电流分别由BK和KV介导。5）SGNs胞内第二信使随缺氧时间的变化：应用酶联免疫吸附实验检测缺氧5min，15 min，20min时，SGNs中 cAMP和cGMP 的浓度，发现cAMP的浓度随缺氧时间先增加后下降，而cGMP 的浓度在先明显下降又出现部分升高现象。6）阿司匹林对豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞的作用及可能机制：阿司匹林浓度依赖性地抑制豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞的外向电流。且IBTX＋4-AP可以取消Aspirin对血管纹毛细血管周细胞外向电流的抑制，说明阿司匹林通过抑制耳蜗血管纹毛细血管周细胞上的BKCa和Kv通道来抑制其外向电流的。