缝隙连接在耳蜗螺旋动脉细胞间信息传递中的作用研究

微动脉血管细胞间直接信息交流的主要途径是缝隙连接，其功能的异常改变与血管的紧张度密切相关。耳蜗螺旋动脉（SMA）是内耳血液供应的唯一途径，它的痉挛（紧张度的改变）或损伤与听力障碍及老年性听力丧失等内耳疾病有关。本项目拟应用全细胞膜片钳技术、双微电极细胞内记录技术、细胞荧光标记技术、分子生物学技术和微动脉血管肌张力检测技术，通过研究不同缝隙连接阻断剂和激动剂对豚鼠SMA分支微动脉血管细胞缝隙连接蛋白的基因表达及蛋白磷酸化水平、细胞电生理学特性、细胞间缝隙连接耦连力、以及SMA微动脉血管舒缩活动的影响。阐明缝隙连接在SMA分支微动脉血管细胞间信息传递中的可能作用，力求找到对SMA强效、特异和可逆的缝隙连接阻断剂或激动剂，为研究和治疗内耳微循环障碍相关性内耳疾病提供新的药物作用靶点，也为临床进一步研究和治疗耳鸣、突发性耳聋、美尼尔氏综合征、老年性耳聋等内耳疾病奠定基础。

本课题是以豚鼠耳蜗螺旋动脉为研究对象，探讨缝隙连接在耳蜗螺旋动脉分支微动脉血管功能中的作用，所获主要研究成果如下：1)豚鼠耳蜗螺旋动脉和冠状动脉细胞静息电位呈双峰分布，高K+和ACh在不同静息电位水平反应形式不同，这种独特的静息电位分布通过激活或失活Kir介导。而肠系膜动脉和小脑前下动脉静息电位呈单峰分布；2)在豚鼠耳蜗螺旋动脉血管上，同类细胞之间有很好的通讯联系（可能与缝隙连接的作用有关）。在内皮细胞和平滑肌细胞之间虽然也存的肌-内皮耦联，但耦联细胞之间的通讯联系表现为单向，即内皮细胞向平滑肌细胞的传递比平滑肌向内皮细胞的传递更为容易。3)豚鼠不同部位微动脉平滑肌细胞在缝隙连接耦联力和电流密度等电生理特性存在差异。电流密度和缝隙连接缝隙连接耦联力大小顺序依次为小脑前下动脉>肠系膜动脉>耳蜗螺旋动脉。4)氟灭酸（NFA）既能通过阻断钙激活的氯通道抑制耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞产生的EJP ,又能激活钙激活钾通道使平滑肌细胞产生超极化反应,表现出对耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞作用的多样性。5)2-APB和DPBA对血管微动脉细胞间缝隙连接通道的阻断作用大约是18-βGA的一半，同样，2-APB和DPBA对平滑肌细胞上KDR电流的抑制作用也大约是18 βGA的一半。2-APB、DPBA对细胞间缝隙连接的阻断作用在豚鼠三种血管微动脉间没有显著性差异，提示三种血管微动脉的缝隙连接具有种属相似性。