人CD34+干细胞条件培养液促进肾损伤后修复再生的实验研究

我们的研究证明，无论是骨髓来源的干细胞还是动员骨髓后进入外周血的CD34+干细胞均可促进肾脏损伤后的修复再生，改善肾脏功能和提高存活率。而其主要作用机制是旁分泌机制，即干细胞进入肾脏后分泌多种促血管生成的细胞因子促进了肾脏血管和肾小管的修复再生。本研究通过G-CSF动员人骨髓产生大量造血干细胞，抽取外周血，利用流式细胞仪挑选CD34+细胞，在体外培养产生大量促血管生成的细胞因子后收取培养液，注射到肾脏缺血再灌注模型鼠体内并分析其成分，利用免疫组化方法及免疫蛋白印迹法研究条件培养液能否促进肾损伤后的修复再生；分析影响肾脏修复再生的重要细胞因子及这些细胞因子作用的靶细胞，并探讨促进细胞修复再生的重要信号传导途径。为临床肾脏病治疗提供新的方向和实验依据。

1. 研究证明血管紧张素受体拮抗剂可以改善肾功能,减少进展性肾小球硬化严重程度，降低动物模型死亡率，并减少尿蛋白的分泌，通过增加血管内皮生长因子(VEGF)的表达而促进肾小球毛细血管再生,减轻病理改变,同时还可以通过促进骨髓来源干细胞招募并证实局部招募的骨髓来源干细胞表达单核/巨噬细胞标记物，但不表达内皮细胞和系膜细胞的标记物。2.制成进展性肾小球硬化模型分为两组：干细胞治疗组，以携带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）转基因阴性大鼠为受体，其同胞EGFP阳性大鼠为供体，将其骨髓干细胞注射入EGFP阴性鼠体内从而制成EGFP+鼠的嵌合体；非治疗组，尾静脉注射等量PBS。研究证实骨髓来源干细胞静脉输注可以改善进展性肾小球硬化模型肾功能，降低24尿蛋白量和死亡率，减轻肾脏病理改变，招募干细胞可分化为内皮细胞，但相对数量较少。3.通过缺血再灌注的方法制成急性肾衰竭的模型，将骨髓基质干细胞和干细胞条件培养液注射入模型鼠体内，研究证实骨髓基质干细胞可以促进肾脏病理的修复，促进管周毛细血管的再生，具有抗炎及抗凋亡的作用，但条件培养液并无此作用。