钝顶螺旋藻藻蓝蛋白在动脉粥样硬化小鼠CD59基因靶向治疗中的应用研究

构建易患动脉粥样硬化载脂蛋白E（ApoE）缺陷小鼠（ApoE (-/-))模型，通过sRNAi技术沉默血管内皮细胞CD59基因活性位点，构建CD59基因缺陷型小鼠（CD59 (-/-)/ ApoE (-/-))。高脂饮食下观察动脉粥样硬化的发展、易损斑块特征，从而揭示CD59基因缺失在动脉粥样硬化发展中的作用。通过脂质体转染将CD59基因转染入血管内皮细胞，探讨CD59基因过度表达对动脉粥样硬化的影响。另外用钝顶螺旋藻藻蓝蛋白进行药物干预，采用先进的分子生物学技术（RT-PCR、FACS、FISH、TUNEL等）检测CD59基因、MAC、细胞周期相关基因(Cyclin、CDK、CKI)、凋亡基因（Fas、NFkB、Bcl-2、c-myc、Caspase）的表达，旨在探讨CD59和藻蓝蛋白在动脉粥样硬化发生发展中的作用机制，并为藻蓝蛋白在动脉粥样硬化基因靶向治疗中的应用开辟新途径。

已按《合同书》要求完成相关研究内容。主要研究成果以论文的形式发表，共发表8篇论文，其中5篇论文被SCI收录。预期该研究成果可达国际先进水平。. 目的：研究钝顶螺旋藻藻蓝蛋白（C-phycocyanin，C-PC）和CD59基因在动脉粥样硬化发生发展中的作用，并探讨CD59基因在藻蓝蛋白抗动脉粥样硬化中的调控作用。. 方法：将80只ApoE基因缺失（ApoE(-/-)）小鼠随机分为五组：对照组、CD59RNAi处理组、CD59过表达组、C-PC处理组、CD59+C-PC处理组。高脂饮食喂养小鼠并进行药物干预。12周后，RT-PCR检测全血中CD59 mRNA水平，Western blot检测组织中CD59蛋白表达量。检测各组小鼠全血血清中TG、TC、LDL、HDL等各项生化指标，截取主动脉根部制作石蜡切片，对切片进行HE染色，显微镜下观察动脉粥样硬化斑块形成情况。采取免疫组化方法检测组织中细胞凋亡相关（Bcl-2、Fas）蛋白、斑块稳定相关（MMP-2）蛋白的表达，TUNEL法和流式细胞仪检测内皮细胞凋亡水平，免疫荧光法和原位核酸杂交技术分别检测平滑肌细胞中细胞周期蛋白Cyclin D1的表达和细胞周期依赖性蛋白激酶CDK4 mRNA水平。. 结果：动脉粥样硬化小鼠模型构建成功，通过脂质体转染实现小鼠组织中CD59基因的干扰沉默或过表达。结果表明CD59基因与藻蓝蛋白都能够降低血脂水平，对细胞周期进行正性调控，维持主动脉细胞增殖与凋亡的稳定性，减缓动脉粥样硬化易损斑块的发生发展。而且C-PC能够促进CD59在小鼠体内的表达。. 结论：CD59基因与藻蓝蛋白都具有显著的抗动脉粥样硬化作用;而且藻蓝蛋白的抗动脉粥样粥样硬化作用机制有可能是通过上调CD59基因的表达水平，促进平滑肌细胞的增殖，阻止内皮细胞的凋亡，降低血脂水平，从而达到抑制动脉粥样硬化发生发展的效果。