重组干扰素慢病毒和HIV-1在靶细胞中的相互作用

Previous investigation found that the persistent infections of target cells with the attenuated nef-deleted HIV-1 strain could provide themselves protective effectiveness against wild-type HIV-1 re-infection, through interfering, blocking or inhibiting HIV-1 replication in the pre-infected cells. However there is safety concern for the potential reversion of attenuated HIV-1 in humans to a pathogenic form，which suggest that the attenuated HIV-1 is not suitable as a biological agent for potential clinical treatment. In recent years, recombinant HIV-1 lentivirus has already passed through a safety assessment, which has been used in clinical gene therapy for human diseases. The lentivirus and wild-type HIV-1 can infect the same target cells.Our previous study indicated that recombinant interferon lentivirus co-infection obviously inhibited Ad5 replication among cells. Therefore, basing on our previous study, this proposal is planning to further explore the transducation rate to CD4 + T cell lines (MOLT-4) and PBMCs transduced by recombinant human interferon α and γ lentiviruses ex vivo, and detect the protection rate to those co-infected cells against challenging with wild-type HIV-1. The study might provide an alternative way for control of HIV/AIDS.

研究发现，缺失nef的HIV-1减毒株对HIV靶细胞的持续性感染能够提供一种保护作用，干扰或阻断HIV-1感染靶细胞，抑制HIV-1在感染细胞中的复制。但是，减毒HIV-1毒株仍存在回复突变等安全性问题，不适合发展成为潜在临床治疗生物制剂。近年来，重组HIV-1慢病毒通过了安全评价，已用于人类疾病的临床基因治疗研究，且其与野生型HIV-1感染的靶细胞相同。我们的前期研究工作表明重组干扰素γ慢病毒和人类腺病毒5型（Ad5）体外共感染能显著抑制Ad5的复制。因此，本课题拟在前期研究的基础上，进一步探讨重组人干扰素α和γ慢病毒，在体外感染CD4+T细胞系（MOLT-4）及PBMC靶细胞的感染率与保护率，评价重组慢病毒在体外感染靶细胞后对HIV-1野毒株再感染的抵御能力，进而探索一条控制HIV/AIDS感染的新途径。

临床上对于HIV/AIDS病人，监测耐药株的出现以提供抗病毒治疗指导是非常有必要的。在该项研究中，病人的pol区编码蛋白酶全长及部分逆转录酶的基因被包装到一个修饰的慢病毒中，该慢病毒携带有双重报告基因ZsGreen和荧光素酶。对最佳的药物浓度和荧光素酶活性之间的相关系数进行优化。在表型测试系统中，慢病毒生产和荧光素酶活性之间存在着一个明确的剂量依赖性关系。使用12种HIV-1抑制剂包括6种核苷酸逆转录酶抑制剂 (NRTIs)，4种非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTIs)和2种蛋白酶抑制剂(PIs)，反应经过治疗的患者毒株对野生型HIV-1毒株的倍数变化用以反映出患者的表型易感性。8名HIV-1感染患者的表型易感性与基因型的评估有80 - 90%的一致性，而10 - 20%存在着表型评估与基因型评估的差异性。用ZsGreen基因替代,当用于大量的HIV - 1感染病人测试时，可以减少把高成本的荧光素酶测试系统消耗费用减少一半。这项研究提供了一个有用的工具来解释有意义的基因型突变及指导临床对的艾滋病毒/艾滋病人进行有效的抗病毒治疗。