人卵丘细胞糖酵解活性在评估卵母细胞发育能力中的作用

研究有效的评估卵母细胞发育能力的指标，是目前人类辅助生殖领域面临的关键问题之一。近年来提出的卵母细胞-颗粒细胞调控环路理论认为卵丘细胞的基因表达和功能状态与卵母细胞发育能力之间有密切关系，为该问题的研究指出一个重要的发展方向。本项目通过研究①人卵丘细胞糖酵解活性及糖酵解途径关键酶磷酸果糖激酶（PFK）、乳酸脱氢酶（LDH）在卵母细胞成熟过程中的时空变化；②人卵丘细胞的糖酵解活性、PFK、LDH表达的调控因素，尤其是卵母细胞分泌因子的作用；③人的单个卵冠丘复合物中，卵丘细胞的糖酵解活性、PFK、LDH与相对应的卵母细胞的发育能力（以体外受精后第三天胚胎的形态学评分及着床率为指标）的关系，明确人卵丘细胞的糖酵解活性及相关指标评估卵母细胞发育能力的可能性。本研究可能发现评估卵母细胞发育能力的新指标，有助于临床上优质卵母细胞和胚胎的选择，促进人类辅助生殖技术的发展。

研究有效的评估卵母细胞发育能力的指标，是目前人类辅助生殖领域面临的关键问题之一。本项目主要研究了卵丘细胞的糖代谢相关酶以及卵丘细胞伸展相关基因与卵母细胞发育能力的关系。.(1)糖酵解途径相关酶PFK、LDH在人卵巢组织中的表达：PFK和LDH在卵巢各级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞上均有表达。原始卵泡和初级卵泡中颗粒细胞上PFK和LDH表达量均高于卵母细胞。原始卵泡中卵母细胞和颗粒细胞上PFK和LDH的表达均明显高于初级卵泡。窦卵泡中颗粒细胞PFK和LDH的表达量高于原始卵泡和初级卵泡。这一结果可能与卵泡在不同的发育阶段中卵母细胞-颗粒细胞双向调控有关。.(2)卵丘细胞的糖代谢相关酶及卵丘细胞伸展相关基因的表达水平与对应的卵母细胞的发育能力的关系：分析354个卵母细胞的卵丘细胞，结果显示，成熟卵母细胞周围的卵丘细胞PFKP、LDHA、PKM2、VCAN和PTGS2的mRNA的表达水平高于未成熟卵母细胞（P<0.05）；形成着床胚胎的卵母细胞周围的卵丘细胞GFPT和VCAN的mRNA的表达水平低于未着床胚胎（P<0.05）。.（3）卵母细胞分泌因子、内分泌激素和旁分泌激素对体外培养的人卵丘细胞的糖代谢的影响：人卵丘细胞体外培养24h，观察卵母细胞分泌因子BMP15、GDF9、FGF8及内分泌激素FSH、旁分泌激素IGFⅠ，在单独及两两组合条件下对卵丘细胞糖代谢的影响。结果显示，在单因素不同浓度条件下，上述因素对卵丘细胞的PFK、LDHA、PKM2、GFPT均无明显影响；FGF8和IGFⅠ共同作用24h，卵丘细胞内PKM2的表达明显升高，而GFPT的表达明显下降（P<0.05）。. 通过本项目的研究，我们达到预期的目标，发现卵丘细胞的PFKP、LDHA、PKM2、VCAN、PTGS2的mRNA表达水平与卵母细胞的成熟有关；而VCAN、GFPT的mRNA表达水平与胚胎着床有关。VCAN和GFPT表达的进一步研究，可望发展成为评估卵母细胞发育能力的新指标，有助于临床上胚胎的选择，提高临床妊娠率。