LASP-1在结直肠癌转移中的作用及其分子机制

LASP-1是本实验室采用蛋白质组学技术筛选获得的差异蛋白，LASP-1在结直肠癌组织中高表达，但其在结直肠癌转移中的作用机制尚未明确。本课题拟采用免疫组织化学等技术检测结直肠癌组织中LASP-1表达，应用活体动物整体成像技术观察LASP-1对结直肠癌细胞体内转移能力的影响；利用免疫荧光化学、激光扫描共聚焦显微技术，观察LASP-1的细胞内定位，探讨LASP-1在结直肠癌细胞骨架蛋白重构中的作用；应用酵母双杂交、差异双向凝胶电泳等高通量蛋白质组学技术鉴定与LASP-1相互作用的蛋白，筛选结直肠癌转移中LASP-1相关信号通路上的关键分子，阐明LASP-1在结直肠癌转移中的调控机制，为临床提供潜在的干预靶点。

LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1, LASP-1)最初是由乳腺癌患者腋窝淋巴结转移灶cDNA文库筛选得到的，是一种特殊的斑联蛋白，涉及许多生物学和病理过程。LASP-1在多种肿瘤中过表达，但在结直肠癌中的作用尚不清楚。我们前期研究通过结直肠癌患者的比较蛋白质组学分析成功鉴定结直肠癌相关蛋白LASP-1。方法：采用免疫组织化学技术，分析LASP-1蛋白在126例结直肠癌中的表达。采用基因转染和RNA干扰技术，研究LASP-1过表达和表达缺失对肿瘤细胞体内外生物学行为的影响。采用双向凝胶电泳分析LASP-1过表达和表达缺失对结直肠癌细胞蛋白质表达谱的影响。采用Flag Pull-down技术分析LASP-1相互作用的蛋白。结果：LASP-1在伴有转移的结直肠癌组织中高表达，其表达水平与结直肠癌患者的总生存率明显相关。RNA干扰介导的LASP-1基因表达沉默能抑制SW620细胞的增殖和迁移，而基因转染介导的LASP-1过表达能诱导SW480细胞侵袭性表型，并促进肿瘤体内生长和转移。LASP-1基因过表达和表达沉默能导致结直肠癌细胞出现相似的蛋白表达谱改变，经过鉴定这些LASP-1调节蛋白为关键的细胞内分子，涉及多种生物学过程。FLAG Pull-down 初步筛选得到LASP-1相互作用蛋白78kDa 葡萄糖调控蛋白(78kDa glucose-regulated protein precursor, GRP 78)和热休克同源蛋白71(heat shock cognate 71kDa protein, HSC71)。科学意义：LASP-1可能是转移性结直肠癌患者治疗的潜在靶点。