重组腺相关病毒介导癌钙蛋白表达对视神经损伤修复的作用研究

Optic nerve injury is one of the most common complications with high disability rate. As a special kind of calmodulin, oncomodulin (oncoM or OCM) has always been considered as a regulatory factor in the growth of tumor only. Recent researches showed that OCM also played an important role in optic nerve regeneration, which however, the exact function and mechanism are still unknown. In this study, we obtained OCM gene from activated rat macrophages by RT-PCR. Packaging and purification two kinds of virus, rAAV-EGFP and rAAV-OCM-EGFP to obtain the effectivc concentration of gene therapy of experiment in vitro animal experiment. Investigating transfection and expression of rAAV in retina after injection rAAV into vitrous. Investigating the effect of rAAV-OCM on axonal growth of RGCs of adult rats both in vitro and in vivo.This issue will clarify the optic nerve repair and regeneration of molecular mechanisms which is important for potential clinical application of ideas.

视神经损伤是颅脑创伤的常见合并症，具有较高的致残率。作为一种特殊的钙调蛋白，癌钙蛋白（oncomodulin, OncoM, OCM）一直被认为只在肿瘤的发生、生长中有调节功能。近来研究表明癌钙蛋白在视神经损伤修复中发挥一定作用，但作为神经科学领域的新兴分子，其确切功能和作用机制尚不清楚。本课题拟通过RT-PCR从活化的大鼠巨噬细胞中获得癌钙蛋白（OCM）基因；利用基因重组技术完成重组质粒rAAV-OCM-EGFP的构建及重组腺相关病毒（rAAV-OCM）的制备和纯化；观察rAAV对视网膜的转染及OCM在视网膜中的表达；利用分子生物学、离体培养和整体动物实验的方法探讨：① rAAV-OCM对体外培养的大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）轴突生长的影响；② rAAV-OCM在成年大鼠体内对损伤后视神经轴突再生的作用。本课题研究结果将对阐明视神经损伤修复再生的分子机制有重要意义，为潜在的临床应用提供新思路。

视神经损伤是颅脑创伤的常见合并症，具有较高的致残率。作为一种特殊的钙调蛋白，癌钙蛋白(oncomodulin, OncoM, OCM)一直被认为只在肿瘤的发生、生长中有调节功能。近来研究表明癌钙蛋白在视神经损伤修复中发挥一定作用，但作为神经科学领域的新兴分子，其确切功能和作用机制尚不清楚。本研究通过视神经损伤模型，采用分子生物学、细胞培养和整体动物实验等方法，对OCM对视神经损伤修复的作用及机制进行了初步探究。. 本课题首先通过RT-PCR从活化的大鼠巨噬细胞中获得癌钙蛋白(OCM)基因，然后利用基因重组技术完成重组质粒rAAV-OCM-EGFP的构建及重组腺相关病毒(rAAV-OCM )的制备和纯化，免疫荧光结果显示rAAV顺利转染视网膜，OCM在视网膜中表达。最后，实验发现，rAAV-OCM可以促进损伤后视神经轴突再生。. 本课题研究结果阐明了OCM在视神经损伤修复再生中的作用及分子机制，为视神经损伤的临床救治提供了新方法。