“桂枝-甘草”药对干预MAPK信号通路对抗缺血再灌注心肌损伤的作用机制及物质基础研究

辛甘化阳药对"桂枝-甘草"是临床常用的补益心阳药对，具有补心气、通心阳的功效，在许多经典方剂中含有该药对。现有研究表明桂枝-甘草在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)治疗方面具有广阔的应用前景。本课题组前期研究表明，桂枝-甘草能明显改善冠状动脉结扎所致的心肌缺血再灌注损伤。然而，目前关于桂枝-甘草抗MIRI的信号通路作用机制和物质基础尚未阐明。因此，在此基础上，我们拟对桂枝-甘草从"药对配伍"-"物质基础"-"信号通路作用机制"展开多层面的研究。本项目拟通过建立整体和离体心肌缺血再灌注模型，以MIRI细胞内信号通路机制的共同靶点-MAPK通路为重点，采用蛋白印迹技术，研究桂枝甘草配伍对MIRI的信号通路作用机制。并利用HPLC、LC-MS/MS高效灵敏的化学成分分析方法，寻找其配伍后在体内发挥药效的物质基础；为最终阐明"桂枝-甘草"配伍理论内涵做出有意义的探索。

辛甘化阳药对“桂枝-甘草”目前是临床常用的补益心阳药对，具有补心气、通心阳的功效。现代药理研究表明桂枝、甘草对心肌缺血再灌注损伤有较好的疗效，其改善作用可能与抗心律失常、扩管、抗氧化等有关。在此基础上，本项目通过对桂枝-甘草从"药对配伍"-"物质基础"-"信号通路作用机制"展开多层面的研究。我们首先通过查阅古今文献，对中药药对的组成方式；桂甘配伍源流及功效；桂枝、甘草化学成分及其对心血管系统的影响进行了系统文献分析。研究表明，通阳为桂枝-甘草药对治疗心系疾病的核心。继而我们从血流动力学、氧化损伤、MAPK信号通路等方面研究了药对“桂枝-甘草”对MI/R的作用及机制，发现桂枝-甘草药对(2:1)配伍能显著改善心肌缺血再灌注损伤，增高缺血期与再灌期LVSP、HR、+dp/dtmax，降低LVEDP水平，改善左室收缩舒张功能；减轻心肌细胞凋亡、坏死；有效降低心肌组织MDA 、LDH、CK水平，增强SOD活性；降低心肌梗死面积的作用，其治疗作用明显优于单味药，其作用机制与激活ERK、抑制p38MAPK 和JNK信号转导通路有关。同时，我们运用了HPLC、LC-MS、GC-MS等技术研究桂枝甘草对MI/R的药效物质基础，发现桂枝配伍甘草能增加桂皮醛的煎出率，减少甘草次酸的煎出率。桂枝与甘草配伍后色谱峰具有加合性，但未发现新峰产生，来源于桂枝的肉桂醛（桂皮醛）含量最高，从而提示肉桂醛是药对桂枝甘草抗MI/R主要药效物质基础。