基于活化巨噬细胞ERK5信号通路介导的胞葬作用探讨冠心康防治动脉粥样硬化的作用机制

The formation of necrotic cores and and disruption of vulnerable plaques in advanced lesion of atheroclerosis(AS) often cause the occurrence of acute cardiocerebro-vascular events.Efferocytosis of macrophage is able to control the progress of atherosclerosis,ERK5 and its related signaling pathway play an important role,but its mechanism is unknown..This research designed to establish rats and macrophages AS model of ERK5-MKO/LDLR-/- in vivo and in vitro, by the use of molecular biology techniques,to observe the phagocytic index of the macrophages, ERK5 and its downstream pathway, genes and proteins of "find-me","not find-me","eat-me","not eat-me" signals related to the efferocytosis,the composition of plaque. And observe the intervension of Guanxinkang prescription and its composition,which can supplement qi,activate blood circulation and remove phlegm evil,so that to provide the molecular mechanism of Guanxinkang prescription and its composition on the delay of the formation of vulnerable plaques and necrotic cores in advanced AS.

在动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）进展期，坏死核形成、斑块破裂常易引发急性心脑血管事件的发生。巨噬细胞介导的胞葬作用被认为可以限制AS的进展，ERK5及其相关信号通路在巨噬细胞胞葬过程中至关重要，但这一过程的具体机制尚未明了。.本研究拟通过体内外实验，建立ERK5-MKO/LDLR-/-动脉粥样硬化小鼠及巨噬细胞模型，采用分子生物学技术，观察AS发展过程中巨噬细胞吞噬指数，ERK5及其下游转导通路、胞葬作用相关的识别与非识别、吞噬与非吞噬信号基因和蛋白的表达以及斑块成分的变化，并观察具有益气活血、化痰降浊之功效的中药复方冠心康及其拆方的干预作用，明确冠心康及其拆方延缓进展期AS易损斑块和坏死核形成的分子机制。

项目背景：.巨噬细胞介导的胞葬作用可以影响动脉粥样硬化的进展，ERK5在巨噬细胞的吞噬过程中具有一定的作用。中药复方冠心康在临床应用切实有效，通过不同机制发挥抗动脉粥样硬化作用。.主要研究内容：.体内实验观察冠心康对 ERK5-MKO/LDLR-/-动脉粥样硬化小鼠胞葬作用、极化作用的影响，及对ERK5 信号通路相关分子表达的调控。体外实验ox-LDL诱导巨噬细胞RAW264.7，并给予冠心康含药血清、ERK5抑制剂，观察巨噬细胞的胞葬作用、极化作用及ERK5 信号通路相关分子表达。.重要结果：.ERK5基因敲除，使LDLR-/-动脉粥样硬化模型小鼠的体重、血脂水平升高，斑块及坏死核面积增大，斑块处凋亡细胞增多，主动脉上巨噬细胞胞葬作用相关信号分子 Axl、ProS、PPAR-δ、Tim4、C1qa 基因和蛋白表达下降；主动脉窦处脂质斑块 MCP-1、IL-10表达降低，MCP-1、FIZZ-1、CHI3L3基因和TNF-α、IL-10 蛋白表达降低。.冠心康改善ERK5-MKO/LDLR-/-动脉粥样硬化小鼠的血脂，减小主动脉根斑块和坏死核的面积，稳定斑块，改善主动脉根斑块处的细胞凋亡，通过ERK5信号通路上调巨噬细胞胞葬作用相关信号分子Axl、Tim4、PPAR-δ、C1qa 基因和蛋白表达来提高巨噬细胞的胞葬作用，斑块处MCP-1降低、IL-10升高，IL-10蛋白表达升高，促进巨噬细胞向M2型转化。.ox-LDL诱导巨噬细胞RAW264.7，给予ERK5抑制剂抑制胞葬作用，调控极化作用，加入冠心康含药血清后，胞葬率升高，上调巨噬细胞Axl、Anxa1、Timd4、S1P1、ProS、C1qA、C1qB、C1qC 基因表达，调控极化作用。.科学意义：.研究冠心康通过ERK5 信号通路调控胞葬作用相关分子的蛋白和基因表达，对动脉粥样硬化进展期中巨噬细胞胞葬凋亡细胞碎片过程的影响，从而阐明冠心康延缓动脉粥样硬化易损斑块及坏死核形成的分子机制，为其临床推广应用提供实验依据。