重组腺相关病毒介导的Nogo66-siRNA和NGF双基因共表达修复脊髓损伤的实验研究

脊髓损伤(spinal cord injury SCI)是一种常见而且严重的临床疾患。近年来，包括Nogo基因在内的许多与脊髓损伤相关的基因被发现和克隆。随着分子生物学技术的发展，基因治疗给SCI的治疗带来了新的契机。本研究拟采用RNAi(RNA干扰技术)，根据目的基因-Nogo66的序列，合成编码该基因的 shRNA（short hairpin RNA）的DNA片段，并克隆NGF片段，插入腺相关病毒包装质粒中，制备同时表达Nogo66-siRNA和NGF的腺相关病毒。在体外观察其是否可以促进神经修复并通过实时定量PCR技术检测其Nogo和NGF基因和表达量的改变。进而进行体内试验，通过免疫组化、电生理技术和实时荧光定量PCR技术观察其对大鼠脊髓损伤的治疗效果，以探求以Nogo基因作为靶点、以RNAi作为阻抑手段及NGF作为靶点、以腺相关病毒作为载体进行双基因共表达治疗脊髓损伤的可能性。