miR-150通过调控T细胞功能在aGVHD发病中的作用及机制研究

Acute graft-versus-host disease (aGVHD) remains a major complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplant (allo-HSCT), current means to prenvent and treatment it still has some limitations.Activated T lymphocytes of donor are the main effector cells leading to aGVHD occurrence, thus exploring the mechanism of its regulation is expected to elucidate the pathogenesis of aGVHD.MicroRNA-150(miR-150),that comprehensive participates in the immune response,provides a new direction for the study of transplantation tolerance. Our previous investigations demonstrate that miR-150 is involved in the occurrence of aGVHD as well as T cells, and we also validate that miR-150 target on the AKT3 gene. Apart from this, AKT3 takes part in the activation of AKT3/FOXO3a/Bim pathway.Based on these observations, we imitate to investigate the role and mechnism of miR-150 in regulating the function of T cells and further explore the impact of miR-150 on aGVHD and GVL.The success of this study will be helpful to further elucidate the mechanism of GVHD pathogenesis, and will provide new strategies for prevention and treatment of aGVHD in clinical.

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）的主要并发症之一，其防治策略具有一定的局限性。供者T细胞介导的免疫应答是目前公认的导致aGVHD的主要原因，探讨其调控机制有望阐明aGVHD的发生机制。miR-150广泛参与免疫应当的调控，为研究移植免疫耐受提供了新方向。我们前期研究中发现miR-150与T细胞功能及aGVHD的发生密切相关，并证明其靶向作用AKT3，后者在AKT3/FOXO3a/Bim信号通路中发挥重要作用。本研究深入探讨miR-150对T细胞作用及其作用的分子机制，并进一步体内实验探讨miR-150对小鼠aGVHD及GVL的影响，有望深入揭示miR-150调控aGVHD的深层次机制，为临床防治aGVHD提供新的靶点。本课题的如期完成有望进一步加深对aGVHD发病机理的认识，拓宽aGVHD防治的思路。

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）相关死亡的主要原因之一，目前针对aGVHD的防治已经取得一定进展，但现有策略尚不能有效控制aGVHD的发生。供者T淋巴细胞各亚群间的免疫平衡决定急性GVHD（aGVHD）的发生及其程度，如何通过调控供者T细胞有效的控制aGVHD是目前研究热点。本课题组前期研究表明miR-150参与T细胞功能的调控，为阐明aGVHD的发生机制提供了新的方向。前期研究已证实miR-150对AKT3的靶向作用；过表达miR-150可以抑制CD4+T细胞活化、增殖，促进其凋亡。本研究进一步构建慢病毒载体shRNA-AKT3及AKT3，通过共转染LV-miR-150及LV-AKT3进行功能恢复试验，发现可以部分逆转miR-150对CD4+T细胞的抑制作用；说明miR-150通过靶向AKT3调控CD4+T淋巴细胞活化、增殖及凋亡。进一步进行机制探讨，发现过表达miR-150后，CD4+T细胞的FOXO3a磷酸化水平下降，FOXO3a与胞核内DNA亲和力增加，从胞质转移至胞核，Bim及其下游促凋亡蛋白Caspase-9蛋白表达升高；提示miR-150抑制AKT3/FOXO3a/Bim信号通路。而共转染LV-miR-150及LV-AKT3后，miR-150对上述信号通路的抑制作用得以部分逆转。进一步构建供鼠CD4+T细胞上调miR-150的aGVHD模型，供鼠CD4+T细胞过表达miR-150减轻HSCT后小鼠aGVHD效应，并抑制小鼠血浆中细胞因子的释放，逆转Th细胞亚群失衡。提示供鼠CD4+T细胞过表达miR-150可以减轻小鼠异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的发生，可能具有诱导移植免疫耐受的作用。本研究有助于深入理解和认识aGVHD的发生及发展机制，可望为临床治疗aGVHD提供强有力的理论与实验依据。