脂联素调控滤泡辅助T细胞数量及功能在类风湿关节炎发病中的作用研究

The role of adipokines in the pathogenesis of rheumatoid arthritis (RA) has attracted more attention in recent years. Our previous work demonstrated that adiponectin (AD) was involved in joint inflammation. However, the mechanism remains unknown. Recently, T follicular helper cells (Tfh) have emerged as a T helper lineage specialized in the assistance of B cells. We have shown that the frequencies of Tfh in the peripheral blood were substantially elevated in RA patients and they were positively correlated with disease progression. Moreover, our recent study found that AD could upregulate the percentages of Tfh in RA in vitro. Therefore, we propose the hypothesis that AD mediates joint inflammation through upregulating Tfh in RA. To test this hypothesis, we will investigate whether AD could regulate the quantity and the function of Tfh in vitro and whether AD-mediated inflammation is depended on Tfh in vivo. Our proposed studies aim to clarify a new mechanism of AD in RA, which might identify AD as a new therapeutic target for RA treatment.

脂肪因子在类风湿关节炎(RA)发病中的作用是近年关注的热点。我们多年的工作已证实脂肪细胞分泌的脂联素(AD)参与形成RA关节炎症，但具体机制尚未阐明。滤泡辅助T 细胞(Tfh)是新近发现的一群辅助T 细胞亚群，其主要功能为辅助B细胞分泌抗体。我们前期工作基础显示RA患者外周血Tfh比例升高且与疾病进展密切相关；近期工作发现体外AD可上调RA患者外周血Tfh比例。据此，本研究提出假说：AD通过上调Tfh进而促进B细胞分泌自身抗体介导RA关节炎症。我们将通过体外观察AD对RA患者Tfh数量和功能的作用；体内以胶原诱导关节炎小鼠为模型，局部高表达或中和AD后观察AD对关节炎症进展和Tfh数量及功能变化间的关系，从体内外、细胞、动物等多个方面阐述AD调控Tfh介导RA关节炎症的作用及其机制。本研究以Tfh为切入点，阐明AD介导RA关节炎症的新机制，为RA的临床治疗寻求更有效的干预靶点。

我们既往前期工作基础显示，类风湿关节炎(RA)患者外周血及滑液中滤泡辅助T细胞(Tfh)水平较OA患者升高，Tfh表面表达脂联素(AD)受体，基于此我们提出假设：AD通过与RA患者CD4+T细胞表面AD受体结合，诱导Tfh增殖分化从而介导关节炎症。我们的研究结果如下：1.Tfh表面表达AD受体1。用无血清、2%FBS、5%FBS及10%FBS的培养基培养细胞，AD刺激后Tfh比例无统计学差异。干扰CD4+T细胞表面AdipoR1，AD刺激后Tfh比例无明显变化。将AD刺激后的RA或OA FLSs与CD4+T细胞共培养，AD 刺激后的RA FLSs共培养体系中Tfh比例明显升高，而AD刺激的OA FLSs共培养体系中Tfh比例无明显变化。2.AD刺激RA FLSs与CD4+T细胞在直接接触和Transwell小室两种共培养体系中Tfh比例无统计学差异。与对照组相比，AD刺激后的RA FLSs与CD4+T细胞共培养上清中IL-6和IL-21水平显著增高。与对照组相比，拮抗AD刺激后的RA FLSs与CD4+T细胞共培养体系中IL-6而非IL-21可显著下调 Tfh比例。与对照组相比，AD刺激RA FLSs组培养上清中IL-6水平显著升高。干扰RA FLSs表面AD受体1表达后，AD刺激组培养上清中IL-6水平显著下降。3.与胶原诱导的关节炎小鼠(CIA)组相比，关节局部注射AD组发病时间提前，且关节严重程度增加。与正常小鼠组相比，CIA小鼠关节局部Tfh比例显著升高；关节局部注射AD组关节局部Tfh比例显著高于CIA组；关节局部注射AD组小鼠关节局部Bcl-6、IL-6、IL-21 mRNA升高，Blimp-1 mRNA水平显著降低。 因此得出结论：AD通过刺激RA FLSs分泌IL-6上调Tfh产生参与RA发病。本实验提示AD作为致炎因子对RA中最重要的效应细胞---RA FLSs发挥作用，通过RA FLSs的间接作用促进Tfh产生参与RA发病，这不仅为我们探讨RA发病机制提供了新的思路，也为我们认识脂肪因子的病理生理作用提供新途径，以及为RA的治疗提供新的治疗靶点。