p120-catenin调控β-catenin转录的分子机制及对肺癌细胞增殖、侵袭的影响

我们发现并报道了p120-catenin（p120ctn）可能在转录水平上调控β-catenin的表达，但具体调节机制目前尚无相关报道。研究表明胃癌中β-catenin启动子区存在超甲基化，我们推测p120ctn可能通过其分子伴侣kaiso结合β-catenin甲基化CPG岛，从而调控其转录。因此，我们拟通过甲基化特异性PCR检测肺癌组织中β-catenin启动子区域甲基化状态，分析其与p120ctn和kaiso的表达关系。建立p120ctn亚型1高表达、"沉默"、突变的肺癌细胞系，双向调控kaiso表达后，应用PCR、免疫共沉淀等方法检测p120ctn亚型1是否通过竞争性的结合kaiso，而抑制其与β-catenin启动子区甲基化CpG岛结合，从而解除kaiso对β-catenin转录的抑制。研究结果不仅可将p120ctn与Wnt信号通路联系起来，而且可为肿瘤的相关研究提供新的理论基础。

根据我们以往的研究结果,我们推测p120-catenin (p120ctn) 可能通过其分子伴侣kaiso结合β-catenin启动子区域甲基化的CPG岛，从而调控其转录，进而影响肺癌细胞的增殖和侵袭能力。因此，在肺癌中β-catenin启动子区域是否存在着甲基化的CPG岛？p120ctn是否通过kaiso调控β-catenin的转录活动？这些正是本项目要解决的关键问题。本研究按原定计划顺利进行，取得的主要成果有：1、肺癌组织中β-catenin启动子区CpG岛存在高甲基化现象，并且其高甲基化状态是导致β-catenin的mRNA表达减弱的原因之一。2、Kaiso能够抑制β-catenin的mRNA表达，并且其转录抑制作用的发挥与甲基化作用相关。3、肺癌细胞系中，β-catenin启动子区域内不仅存在可以与kaiso结合的甲基化的CpG双核苷酸序列，还意外的发现其启动子区域内还存在能够与kaiso结合的KBS序列，但在肺癌细胞系中kaiso只能够与CpG双核苷酸序列结合而不与KBS序列结合。4、肺癌细胞系中p120ctn能够与kaiso结合，进而抑制kaiso与β-catenin启动子区域的结合，并由此解除kaiso对β-catenin的转录抑制作用。5、p120ctn亚型能够与kaiso结合并影响kaiso的表达定位，进而调控肺癌细胞的侵袭能力。并且这种表达调控作用与p120ctn的磷酸化状态密切相关。6、p120ctn的不同亚型可以分别通过调控β-catenin和kaiso的表达，进而影响肺癌细胞的增殖能力。本研究不仅按照原计划圆满完成，同时还进行了适当的扩展，在某些方面有了新的发现和突破：虽然我们证实到p120ctn能够通过kaiso调控β-catenin的mRNA表达，但同时，我们也发现kaiso并不是p120ctn调控β-catenin转录的唯一途径。因此，本研究适当的扩展了Wnt信号通路中可能与p120ctn及β-catenin表达相关的部分蛋白的检测，初步探讨可能参与p120ctn调控β-catenin转录的其它机制，为课题的深入和扩展奠定了基础。本项目研究结果不仅可将p120ctn与Wnt信号通路联系起来，而且可为肿瘤的基础研究和基因治疗提供新的思路和靶点。