LncRNA-NEAT1通过ceRNA作用促进卵巢癌血管新生的机制研究

The ovarian cancer mortality rate ranks first in female genital tumors and the current diagnostic methods and treatment prove to be ineffective. It's the first time that the abnormal expression of miR-214 and Sema4D in ovarian cancer is reported in our previous study and we found that miR-214 regulates Sema4D at the post-transcriptional level so as to control angiogenesis. Clarifying the reasons of the two abnormal expressions in ovarian cancer and discussing in-depth about the mechanism of angiogenesis are two key links to screen for early markers and improve the therapeutic effect. In this study, we first proposed that the expression of LncRNA-NEAT1, miR-214 and pro-angiogenic factor (Sema4D/VEGF/XBP1) were detected in ovarian cancer and the regulation of miR-214 by LncRNA-NEAT1. Inhibition of miR-214 by LncRNA-NEAT1 activates the Sema4D/VEGF/XBP1 signaling pathway and promoted tumor proliferation, invasion, metastasis and angiogenesis. Relevant indicators in the simultaneous detection blood of exosomes and tissue analysis of the correlation. This study has great innovation and a good foundation, which have important guiding significance in early diagnosis and prognosis of ovarian cancer.

卵巢癌死亡率居女性生殖系统肿瘤首位，目前的诊断手段和治疗效果欠佳。我们前期研究首次报道了，miR-214和Sema4D在卵巢癌异常表达，发现miR-214在转录后水平调控Sema4D，进而调控血管新生。明确二者在卵巢癌中异常表达的缘由，深入探讨调控血管新生的机制，是筛寻早期标记物和提高治疗效果的关键环节。本研究我们首次提出：在卵巢癌中检测LncRNA-NEAT1、miR-214及促血管生成因子（Sema4D/VEGF/XBP1）的表达，观察LncRNA-NEAT1通过ceRNA对miR-214的调控及对上述促血管生成因子的影响。LncRNA-NEAT1竞争抑制miR-214，激活Sema4D/VEGF/XBP1信号通路，促进肿瘤增殖、侵袭、转移和血管新生。相关指标在血清外泌体同时检测，解析组织与血液中相关性。本研究具有良好基础及创新性，对卵巢癌早期诊断和监测预后有重要指导意义。

卵巢癌的死亡率位于女性生殖系统肿瘤的首位，血管新生是肿瘤发生和转移的基本条件。我们前期研究表明，Sema4D在卵巢癌中发挥促血管新生作用，受miR214负向调控，但具体的机制尚不清楚。我们对本院接受抗癌治疗的卵巢癌患者的临床资料、组织样本进行分析，结果显示IncRNA-NEAT1在卵巢癌组织中高表达。通过细胞实验，筛选出SKOV3、A2780两种IncRNA-NEAT1高表达的卵巢癌细胞，采用过表达和沉默策略，分别在SKOV3、A2780两种细胞株中，利用慢病毒转染，RT-PCR、Western Blot、细胞增殖实验、细胞划痕实验、流式细胞术、ELISA、免疫组化等技术，分析比较过表达及沉默IncRNA-NEAT1前后细胞增殖、侵袭和迁移的能力。发现过表达IncRNA-NEAT1显著促进细胞增殖、侵袭和迁移的能力，降低细胞凋亡水平，同时发现过表达IncRNA-NEAT1促进卵巢癌细胞中Sema4D、VEGF、XBP1等血管新生相关基因表达，抑制miR-214的表达，而沉默IncRNA-NEAT1对卵巢癌细胞有相反的结果。根据以上结果，我们初步证实IncRNA-NEAT1促进卵巢肿瘤增殖与激活Sema4D/VEGF/XBP1 信号通路有关。并采用双荧光素酶实验及生物信息学技术用于验证IncRNA-NEAT1和miR-214之间的调控作用。为了进一步证实我们的假设，明确IncRNA-NEAT1在卵巢癌中的作用， 并探讨IncRNA-NEAT1与miR214的相互作用，我们构建异体肿瘤移植模型进行体内研究，发现过表达IncRNA-NEAT1的卵巢癌细胞在裸鼠内的成瘤能力显著增强，Sema4D、VEGF、XBP1等基因的表达显著上调。并且我们发现在肿瘤细胞中同时过表达IncRNA-NEAT1和miR-214，过表达IncRNA-NEAT1促进肿瘤组织增殖的作用受到miR214的抑制。以上结果再次证实IncRNA-NEAT1拮抗miR-214的表达促进肿瘤增殖可能与激活Sema4D/VEGF/XBP1 信号通路有关。本研究为卵巢癌血管新生的机制提供了新的科学依据，阐明了IncRNA-NEAT1促进卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制，为卵巢癌靶向治疗的提供新的靶标。