nNOS-PSD-95解偶联剂的设计、合成及生物活性研究

脑卒中严重危害人类健康，迄今临床上少见疗效确切的治疗药物。脑缺血后NMDAR过度激活，通过NMDAR-PSD-95-nNOS通路病理性释放的NO，是导致神经损伤的重要原因。nNOS-PSD-95解偶联剂ZL006能够抑制NO的病理性释放、改善脑缺血再灌注大鼠神经缺陷症状、缩小脑梗死容积，因其不直接干预nNOS、PSD-95而具有更好的安全性。本项目拟在前期研究的基础上，以ZL006为先导化合物，对其疏水端、亲水端、连接基团进行结构修饰，设计合成新的目标化合物，采用蛋白-蛋白结合活性筛选模型，考察其nNOS-PSD-95解偶联作用，结合计算机辅助药物设计等手段，阐明nNOS-PSD-95解偶联剂的构效关系，以利于该类药物的进一步研究。通过体外、体内实验确证其作用靶点的特异性、安全性，考察其对缺血性脑损伤的保护作用，发现新型抗脑卒中候选药物，为开发具有自主知识产权的抗脑卒中新药打下基础。

脑卒中严重危害人类健康，迄今临床上少见疗效确切的治疗药物。项目申请人前期发现的nNOS-PSD-95解偶联剂ZL006能够抑制NO的病理性释放、改善脑缺血再灌注大鼠神经缺陷症状、缩小脑梗死容积，因其不直接干预nNOS、PSD-95而具有更好的安全性。本项目在前期研究的基础上，以ZL006为先导化合物，对其疏水端、亲水端、连接基团进行了结构修饰，设计合成新的目标化合物，采用蛋白-蛋白结合活性筛选模型，考察其nNOS-PSD-95解偶联作用，结合计算机辅助药物设计等手段，初步阐明了nNOS-PSD-95解偶联剂的构效关系：ZL006疏水端2位羟基对于化合物活性保持是必须的，3位氯可以被甲基取代，但是引如较大的基团不利于活性保持，5位氯可以被甲基取代，以及较大的基团如溴、特丁基等，ZL006亲水端羧基可以用其他酸性基团代替；ZL006亲水羟基也用胺基代替；但是ZL006亲水端羧基、羟基的位置不能改变。连接基团碳原子增加其他取代基不能增加活性。连接基团氮原子甲基化活性下降。通过计算机模拟以及预实验结果，采用4-VP为功能单体，采用悬浮聚合法，建立了nNOS-PSD-95解偶联剂人工抗体，初步的实验结果显示，该人工抗体对nNOS-PSD-95解偶联剂结合实验结果与采用动物体内nNOS-PSD-95解偶联实验数据吻合，从而为该类药物的活性评价提供了高通量快速筛选的方法；对ZL006的体内代谢途径进行了研究，获得了较长作用时间、脑组织分布较好的目标化合物，发现了新型抗脑卒中候选药物ZL006-05，ZL006-05在动物模型上显示了良好的药效和安全性，为开发具有自主知识产权的抗脑卒中新药打下了基础。