基于体内过程的“威灵仙-羌活”药对抗类风湿关节炎主效成分(群)的发现及作用机制研究

Rheumatoid arthritis (RA), serious hazard to human health and quality of life, is a common and well-known disease. Traditional Chinese medicine treatment of RA has an unique advantage in clinical practice with a long history. Our pre-experiment found that high dose group (8g/kg, four times of human clinical dosage ) "Clematidis - Notopterygii " couplet medicines ( CN couplet medicines) showed strong anti- RA activity, however, its main active ingredient group and mechanism are unclear which urgently need for further research. Using integration of multi-disciplinary research resources and technology, analyze the chemical components (group) based on in vivo processes, use " Multi-component capture and multi-directional activity feedback oriented active component group" strategy, design screening model and analytical methods according to the inflammation of RA, proliferation of FLS and angiogenesis three key pathologic processes of RA to discover the main active ingredient (group) for anti-RA; Using cell and molecular biology techniques, and basing on the statement of synovial vascular endothelial growth factor in microenvironment, preliminarily study "CN couplet medicines " main active ingredient (group) and the mechanism of anti- RA activities. This study aim to clarify main active ingredient (group) in "CN couplet medicines" for anti- RA, initially reveal the mechanism of anti- RA activities. This project will provide a scientific foundation of secondary development and clinical applications for "CN couplet medicines", and exploit high efficient, low toxicity and innovative component drugs from traditional Chinese medicine for the treatment of RA.

类风湿关节炎（RA）是严重危害人类健康和生活质量的常见疾病，中药治疗RA历史悠久且独具优势。预实验发现，“威灵仙-羌活药对”（威-羌药对，8 g生药/kg，人临床用量4倍）具有极强的抗大鼠佐剂关节炎活性，但其主效成分（群）不明，作用机制不清，亟待进一步研究。本研究融合多学科资源、技术，全面表征基于体内过程的“威-羌药对”体内化学成分（群），采用“多成分定向捕获-多靶标活性反馈”策略，针对RA炎症反应、滑膜增生和血管新生三个关键病理过程设计筛选模型和分析方法，揭示“威-羌药对”治疗RA的主效成分（群）；利用细胞和分子生物学技术，从上述关键病理过程切入，初步探讨“威-羌药对”主效成分（群）抗RA作用机制。本研究将阐明“威-羌药对”抗RA的药效物质基础，初步揭示其作用机制，将为“威-羌药对”的临床应用和二次开发提供科学依据，为“威-羌药对”中高效、低毒的抗RA创新中药组分药物的开发奠定重要基础。

类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种以慢性、对称性、进行性和侵袭性多关节炎为主要表现，以关节滑膜炎及血管翳形成为主要病理特征的、病因不明的、全身性自身免疫性疾病。我国患病率为0.32% ~ 0.36%，女性患病率是男性的3倍。RA是导致人群丧失劳动力的主要疾病之一，具有较高的致残率，严重危害人们的健康和生活质量。中药以其安全、低毒、副作用小以及多成分、多靶点的作用特点，吸引了大批研究者的目光，从中药中开发、寻找治疗RA的药物，具有重要的社会意义和实用价值。本研究以“威-羌药对”为研究对象，首先对药对的化学成分进行了全面表征，从药对中共鉴定出化学成分69个。其中香豆素类27个，三萜皂苷类11个，木脂素类6个，黄酮类2个，聚烯炔类2个，生物碱1个，其他类成分有20个；以上69个成分中，23个来源于威灵仙，46个来源于羌活；并建立了其中8个成分（羌活醇、齐墩果酸、异欧前胡素、紫花前胡苷、常春藤皂苷元、佛手柑内酯、佛手酚、佛手柑素）的定量分析方法。然后基于中药口服后的体内过程，发现了“药对”抗类风湿关节炎的主效成分并对其进行分离制备；继而采用炎症细胞模型和血管内皮细胞成管模型对“药对”主效成分的体外抗RA的作用，研究结果发现：主效成分可以显著抑制脂多糖（LPS）刺激RAW 264.7小鼠巨噬细胞中NO的生成，还可以显著抑制内皮细胞增殖和VEGF诱导的内皮细胞血管形成；最后采用佐剂性关节炎AIA大鼠模型，观察主效成分灌胃AIA模型大鼠后，对关节炎症及滑膜病理改变的影响，探讨主效成分的体内抗RA药理活性作用及其作用机制，研究结果发现：给予主效成分治疗关节炎大鼠后，大鼠足肿胀度减轻，血清、关节滑膜组织中的炎细胞中的细胞因子生成量（IL-6、TNF-α和VEGF）与模型组相比都显著的降低，进一步证实了主效成分（的体内抗类风湿关节炎作用，且主效成分可能是通过抗炎和抑制血管生成两个方面来发挥抗类风湿关节炎作用的。本课题研究为经典抗类风湿“药对”的临床应用和二次开发提供了实验依据和数据支撑。