RhoA对胃癌循环肿瘤细胞转移及生存能力的调控及分子机制研究

Incidence rate of Gastric cancer in China was second, and gastric cancer has become a serious threat to the health of the people of the hidden dangers and one of the major causes of mortality. Hematogenous metastasis is one of the major route of metastasis, and circulating tumor cells in the tumor metastasis plays a crucial role in the initiation step. Our group and several other research groups have successfully isolated gastric cancer CTCs, cultured in vitro. Our recent study found that, compared with primary cultured gastric tissue and gastric cell lines, the expression of RhoA in gastric CTCs was significantly higher, and RhoA inhibit the EMT key molecules regulating. We hypothesized that RhoA plays an important role in metastasis and survival in gastric cancer CTCs. In this project, based on previous research on the relationship between Rho protein family and cancer, by means of the established isolation and culture technique in vitro of gastric CTCs, to explore the regulation between RhoA and metastasis and survival of gastric CTCs and underly molecular mechanisms, clarifying effects of the RhoA and its downstream signaling pathways on clinical significance of gastric CTCs, providing new ideas and new targets for the treatment of gastric cancer targeted intervention.

我国胃癌占恶性肿瘤发病率的第2位，胃癌已成为严重威胁国人健康和主要致死原因之一。血行转移是胃癌转移的主要途径之一，而循环肿瘤细胞在肿瘤转移起始步骤中扮演着至关重要的的角色。我课题组已成功分离出胃癌CTCs，并成功在体外培养及裸鼠成瘤。我课题组新近的研究发现，胃癌CTCs中RhoA的表达明显增高，而RhoA的抑制明显调控了EMT关键分子。我们推测RhoA在胃癌CTCs的远处转移及生存中扮演了重要角色。在本项目中，我们拟在既往对Rho家族蛋白与肿瘤关系的研究基础上，利用已经建立的胃癌CTCs体外分离及培养技术，体内外系统研究RhoA对胃癌CTCs的血行转移的调控及潜在的分子机制，阐明RhoA及其下游信号通路因在胃癌CTCs血行转移中的作用和临床意义，为胃癌转移的靶向干预治疗提供新思路和新靶点。

胃癌是常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居高不下，多数患者在初诊时已伴有脏器转移，因此研究胃癌的转移机制具有重要的临床意义。目前肿瘤的转移是一个多步骤多因素参与的复杂过程，越来越多的研究发现循环肿瘤细胞（circulating tumor cells, CTCs）在肿瘤的转移过程中起着重要的作用。因此研究循环肿瘤细胞的生物学行为及分子生物学特点将为理解肿瘤的转移机制提供详实的理论依据，这将为临床治疗提供重要的靶点。我们拟在既往对Rho家族蛋白与肿瘤关系的研究基础上，检测胃癌患者CTCs中RhoA及下游信号通路相关分子的表达，分析其与临床病理因素的关系，体内外系统研究RhoA对胃癌CTCs恶性生物学特性的影响及其分子机制，为胃癌转移的靶向干预治疗提供新途径。结果显示，通过改良的CD45-免疫磁珠筛选联合CD44+流式细胞双重筛选胃癌循环肿瘤细胞，我们从华西医院肿瘤中心IIA-IV期胃癌患者中分离出胃癌循环肿瘤细胞，裸鼠成瘤实验联合分子影像技术显示胃癌循环肿瘤细胞较胃癌细胞株相比具有更强的成瘤能力及更早更强的肝脏转移能力，体外实验证实胃癌循环肿瘤细胞具有更强的克隆形成能力，细胞免疫荧光及western blot显示，与胃癌细胞系相比胃CTCs表现出较明显的EMT，并对放化疗和靶向药物存在治疗抵抗。此外，我们的研究显示，在伊立替康耐药细胞系较其亲代细胞系RhoA的相对表达量增高，RhoA的表达水平与肿瘤细胞的p-gp，mrp1，GSPT1，IGFIR,Bcl-xl，bcl-2的表达水平呈正相关，与bax表达水平呈负相关。RhoA表达水平与肿瘤细胞对多种化疗药物的耐药指数呈正相关，与肿瘤细胞的凋亡数量呈正相关，与肿瘤细胞中SP细胞的比例呈正相关。该项目将为我们深入认识RhoA在胃癌CTCs中的生物学作用及分子生物学特点奠定基础，将为理解肿瘤的转移机制提供详实的理论依据，从而为胃癌转移的靶向干预治疗提供新途径。.在本项目的资助下，我们发表SCI论文10篇；培养博士研究生1名，硕士研究生3名；以上成果均达到预期目标。总之，我们良好的完成了项目的预期研究内容和目标。