病理情况下谷丙转氨酶同工酶表达水平与谷丙转氨酶活性关系的研究

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性升高被认为是肝损伤的一种灵敏指标，但血清ALT活性升高在非肝损害时也可能出现，目前其升高的机制仍然不明。近年来对ALT同工酶的研究发现它们在结构、分布及基因调节上有明显差异，提示ALT同工酶在不同临床情况下有不同的活性作用，它们的表达水平可能分别与多种病理情况相关。因此，特异性ALT同工酶的测定对探索不同病理情况下血清ALT活性升高机制、丰富ALT的理论知识有极重要意义。本研究拟通过采用基因重组技术获得ALT1和ALT2同工酶重组蛋白，分别筛选制备出高特异性、高活性的ALT1和ALT2同工酶单抗，用抗原抗体反应特异性方法检测并区分ALT同工酶，研究不同病理条件下ALT同工酶蛋白表达与ALT活性关系，以理解不同的病理条件下血清ALT变化的分子机制。

研究工作原计划在三年内完成，第一、二年研究进展较为顺利地完成了计划的研究内容，加上前期工作，成功制备了效价好、亲和力高、特异性好的ALT1和ALT2单克隆抗体，同时用所得单抗检测了临床血清样本ALT同工酶情况，初步探索血清中ALT同工酶与ALT活性的关系。第三年收集相关临床样本对ALT同工酶在组织中的定位分布、含量以及与疾病相关性进行研究。检测结果显示 ALT1的基因水平在小肠、大肠中高表达，其次是结肠、胃，而在肝脏中低表达；蛋白水平在骨骼肌、心肌中高表达，其次是小肠、结肠，在胃组织、肾组织中中度表达，在肝脏组织中低表达。不同的病理显示，对肌肉组织由高到低依次为：骨骼肌癌旁组织＞恶性平滑肌肉瘤＞多形性横纹肌肉瘤＞中度恶性的纤维肉瘤＞小泡型横纹肌肉瘤＞隆突性皮肤纤维肉瘤＞高分化脂肪肉瘤＞黏液性纤维肉瘤；对心血管组织由高到低依次为：正常心脏组织＞血管肉瘤＞上皮样血管内皮瘤＞心脏恶性间皮瘤；对肠道组织由高到低依次为：小肠癌旁组织＞结肠腺癌＞结肠癌旁组织＞结肠黏膜慢性炎症＞小肠腺癌；对胃组织由高到低依次为：胃癌旁组织＞胃粘膜慢性炎症＞胃腺癌；对肾组织由高到低依次为：正常肾组织＞肾麟癌＞透明细胞癌＞肾乳头状瘤；对肝脏组织由高到低依次为：慢性肝炎＞肝脏癌旁组织＞肝细胞癌。我们的ALT1结果与文献报道的不相符：我们的结果显示无论是基因水平还是蛋白水平，ALT1在肝脏中表达低而已发表的研究均显示ALT1在肝脏中表达高。这使得我们所得的ALT1在不同病理条件下表达的结果还需验证。分析原因考虑两方面：或者是我们的实验过程在哪里出了差错，或者是我们的新发现。如果我们的ALT2检测结果与文献报道相符，就说明我们的ALT1可能存在问题；反之，如果我们的ALT2检测结果与文献报道不相符，而与我们的ALT1结果相对，说明我们的结果可能是新的发现。而我们在2013年获得的ALT2单抗细胞株由于保管不善被污染，无法进行临床样本分析。这使得我们不得不调整实验方案，重新制备ALT2单抗，目前正在制备过程中。正因为如此，耽搁了投稿时间，所以目前有3篇文章已投出未正式发表。人才培养方面，在本项目资助下，共培养博士研究生1名，硕士研究生4名。