基于p38MAPK信号通路的解毒化浊祛瘀方对铜负荷大鼠肝星状细胞凋亡干预的代谢组学研究

Wilson disease is an autosomal recessive disorder of copper homeostasis, liver is the first organ involved in, hepatic fibrosis is the main liver pathological change almost in every WD patients. Research shows:hepatic fibrosis is reversible，it is the hot spot of treatment to hepatic fibrosis by taking HSC as targets and interfering with the way such as cell signaling pathways at present，metabolomics is also a powerful tool of overall efficacy evaluation of traditional Chinese medicine.According to the pathogenesis of copper poison deposition,stagna-.tion of phlegm and blood and principles of modern medicine,our research group put forward the following points:the detoxification resolving turbidity and expelling stasis recipe probably reverse hepatic fibrosis in WD through p38MAPK signal pathway to induce apoptosis of HSC, probably affect the change of small molecules metabolites of liver tissue. This topic carry out the following research based on the previous work: taking p38MAPK signalling pathway and metabolomics as the breakthrough point, to preliminary discuss the intervention role of the detoxification resolving turbi-.dity and expelling stasis recipe to HSC signalling pathway of hepatic fibrosis in copper overload rats. In order to find the acting targets of the recipe for hepatic fibrosis in WD，to establish the foundation of molecular biology for the detoxific-.ation resolving turbidity and expelling stasis recipe to cure hepatic fibrosis in WD.

肝豆状核变性(Wilson disease,WD)是常染色体隐性遗传铜代谢障碍性疾病，肝脏是WD最先受累的脏器之一，肝纤维化几乎是每个WD患者肝脏主要病理改变。研究证明：肝纤维化是可以逆转的，以HSC为靶标、干扰细胞信号通路等途径治疗肝纤维化，是目前研究的热点，代谢组学亦是中药整体药效评价的有力工具。课题组依据WD肝纤维化铜毒内蕴、痰瘀阻络的病机及现代医学原理提出：解毒化浊祛瘀方肝豆汤可能通过p38MAPK信号通路诱导HSC凋亡、影响肝组织小分子代谢物的变化而逆转WD肝纤维化。本课题拟在前期工作基础上开展以下研究：以p38MAPK 信号转导通路、代谢组学为切入点，初步探讨解毒化浊祛瘀方对铜负荷大鼠肝纤维化HSC信号通路的干预作用，以期发现该方对WD肝纤维化的作用靶点，为解毒化浊祛瘀方治疗WD肝纤维化建立分子生物学基础。

摘要.1、项目研究背景：肝豆状核变性(Wilson disease,WD)是常染色体隐性遗传的铜代谢障碍疾病。研究表明，肝脏是WD最先受累的脏器之一,肝纤维化几乎是每一个WD患者肝脏的主要病理改变。WD肝纤维化引起的肝功能衰竭通常是WD患者死亡的主要原因，因此重视对WD肝纤维化的早期干预对于改善肝功能及预后具有十分重要的意义。2、研究主要内容：本课题在铜负荷大鼠动物模型中开展了以下研究，观察①解毒化浊祛瘀方对铜负荷大鼠p38MAPK信号通路的作用，包括对HSC凋亡及其下游细胞因子表达的影响；②解毒化浊祛瘀方对铜负荷大鼠肝组织代谢标志物的作用。3、重要结果：3.1 肝豆灵可以减轻铜负荷大鼠肝纤维化病理程度，可促进铜负荷大鼠HSC的凋亡。3.2 p38MAPK 信号通路可能参与 WD 肝纤维化的发生、发展，肝豆灵可能通过干预 p38MAPK 信号通路的表达而发挥抗纤维化作用；3.3 肝豆灵对铜负荷大鼠小分子代谢物有明显的调节效应，对代谢异常的修复作用可能是治疗WD 肝纤维化的作用机理之一。4、关键数据及其科学意义：发现肝豆灵可以减轻铜负荷大鼠肝纤维化病理程度，HSC凋亡指数明显升高，有诱导HSC凋亡的作用；铜负荷大鼠肝纤维化时p38MPK被激活，可能参与了铜负荷大鼠肝纤维化发生、发展的过程，肝豆灵可能通过对p38MPK信号通路的抑制作用而发挥抗纤维化改善肝功能的作用。本实验运用代谢组学技术检测肝豆灵对铜负荷大鼠肝纤维化代谢标志物的影响，发现肝豆灵组血浆亮氨酸、异亮氨酸、胆碱、葡萄糖、3-羟基丁酸的含量升高、糖蛋白、脂质、乳酸盐、丙酮酸盐的含量降低，提示肝豆灵有调节氨基酸、糖、脂肪代谢的作用，同时研究了肝豆灵对铜负荷大鼠肝组织代谢产物的干预作用，得到溶血卵磷酯、苯丙氨酸、色氨酸、甘氨胆酸、牛磺酸鹅脱氧胆酸、硬脂酰胺、牛磺胆酸、油酸酰胺等特征性代谢物，研究发现肝豆灵对铜负荷大鼠肝纤维化以上分子代谢物有明显的调节效应，对代谢异常的修复作用可能是治疗WD 肝纤维化的作用机理之一。