TRAIL在动脉粥样硬化发生发展中作用机制的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肿瘤细胞有凋亡作用而对正常细胞无细胞毒作用，因其高选择性，在肿瘤领域备受关注，近年有研究表明TRAIL参与了动脉粥样硬化（AS），但在其中的作用和机制知之甚少。本研究采用apoE敲基因鼠，在单纯高脂饲养同期对照下，在斑块形成的不同阶段通过过表达（转染携带TRAIL基因的腺病毒）及抑制表达（埋藏式微量渗透泵泵入TRAIL阻断剂）正反两个方面研究验证。并进一步在TRAIL/apoE双基因敲除鼠中深入研究。超声动态观察各组斑块进展;病理检查斑块脂核大小、纤维帽厚度等;免疫组化、RT-PCR、westen对TRAIL及炎性指标等进行定性定量分析，同时检测血清学各项指标，以了解斑块中TRAIL的作用以及干预前后斑块变化并观察这些变化是否与干预因素相关。并进一步通过体外实验深入研究TRAIL诱导巨噬细胞凋亡泡沫化的作用机制，并筛选信号转导通路上的关键分子。

在体内，我们用TRAIL 重组腺病毒载体的方法证实了TRAIL对晚期动脉硬化斑块有减轻和稳定作用。.1.大体组织油红O染色证实TRAIL过表达组主动脉斑块的负荷明显降低（P<0.005）。为进一步验证主动脉斑上的发现，我们进行了颈动脉套管实验，8周后斑块面积的超声测量得到同样结论---TRAIL腺病毒转染后显著降低了apoE-/-小鼠动脉粥样硬化的发展和负荷。sDR5阻断内源性TRAIL后，斑块的负荷增加，从反方向验证了TRAIL在动脉粥样硬化发展中的作用。.2.筛选外周血CD4+T、CD8+T、NK、B细胞发现，随着动脉粥样硬化的发生，外周血CD4+T、CD8+T、NK表达TRAIL也随之上调，其中以CD8+T和CD4+T最为显著。.3. TRAIL腺病毒转染后显著增加了斑块的平滑肌细胞的含量、增加了纤维帽的厚度，胶原的含量也有增加的趋势，降低了斑块内巨噬细胞的含量和脂质含量。总的易损指数降低，增加了斑块的稳定性。.4.TRAIL可能是通过抑制炎症因子的表达和降低MMP家族成员的含量来实现稳定斑块的作用。过表达TRAIL组，炎症因子ICAM、MCP-1 、IL-6、IL-18、TNF-a的表达降低，MMP-3、MMP-9、MMP-12的表达也降低。TRAIL稳定斑块的另一作用机制可能是其选择性凋亡的作用，在本实验中，TRAIL增加了巨噬细胞的凋亡，但平滑肌细胞未见凋亡。检测块中凋亡通路的关键分子，其中促进凋亡的Bax、caspase8显著增高，抑制凋亡的Bcl-2显著升高。.5.我们意想不到的一个发现是TRAIL对早期动脉硬化斑块和晚期动脉硬化斑块存在相反作用。我们观察到TRAIL在ApoE基因敲除小鼠中增加了早期斑块的形成。这项发现文献内尚没有报道，因此其创新性和临床意义非常明显,其具体作用机制将是以后深入研究的方向。