JAML在动脉粥样硬化发生发展中作用机制的研究

单核细胞的内皮下浸润和泡沫细胞形成是动脉粥样硬化（AS）形成的始动环节，连接粘附分子蛋白（JAML）因在单核细胞跨内皮转移的重要作用近年来备受研究者关注，但JAML在AS发生发展中的作用和分子机制知之甚少。为探明JAML在AS发生和发展过程中的作用，本课题采用首先在体外实验研究JAML对单核细胞趋化、巨噬细胞泡沫化和炎症反应的作用机制，筛选关键信号分子；然后在高脂喂养的ApoE敲基因小鼠，在斑块形成的不同阶段通过过表达和干扰慢病毒载体，从正反两个方面验证假设。超声动态观察各组斑块进展，病理学检查斑块脂核大小、纤维帽厚度；激光共聚焦、免疫组化、实时定量RT-PCR、Western blot等技术对JAML及炎性指标和关键信号分子进行定性定量分析，同时检测血清学各项指标，以了解斑块中JAML的作用机制以及干预前后斑块变化并分析这些变化是否与JAML干预有关。

炎症反应是动脉粥样硬化的内在因素之一。近年的研究发现新型链接粘附分子样蛋白(junction adhesion molecule-like protein, JAML) 在单核细胞粘附和迁移过程中发挥着至关重要的作用。动脉粥样硬化的发病机制复杂，JAML在动脉粥样硬化疾病中是否发挥作用国内外尚未见相关报道。本课题应用APOE-/-敲基因小鼠及体外培养的单核/巨噬细胞，探索了JAML在动脉粥样硬化中的作用及其调控机制。结果表明，JAML在高脂喂养的APOE-/-小鼠主动脉中表达明显高于C57BL/6小鼠。因此我们我们构建了JAML shRNA慢病毒表达载体，进一步研究了JAML基因敲除对于动脉粥样硬化形成和斑块稳定性的影响。结果发现，在早期动脉粥样硬化模型中，JAML基因敲除显著减少主动脉表面斑块面积，提示JAML在动脉粥样硬化形成中发挥重要作用；在晚期斑块模型中，JAML基因敲除显著减少巨噬细胞和脂质含量，增加胶原和平滑肌细胞含量，提示JAML对于动脉粥样硬化斑块稳定性发挥着重要作用。最后我们通过体外实验对JAML调控动脉粥样硬化的机制进行了探讨。结果发现oxLDL促进巨噬细胞JAML及表达，进一步的研究发现oxLDL影响巨噬细胞脂质转运相关蛋白SR-A、ABCA1、ABCG1的表达，然后我们进一步证实了ABCA1在JAML介导的动脉粥样硬化中的作用。本课题首次揭示JAML在动脉粥样硬化中的生物学作用及分子机制，并为疾病的防治筛选新的靶点，具有重要的理论意义和潜在的临床应用价值。