基于入血成分谱效关系的回药红柳治疗类风湿关节炎药效物质研究

Rheumatoid arthritis (RA) threatens human health seriously, because of its high morbidity and disability. Tamarix ramosissima, a kind of Hui medicine, is an effective and widely-used folk medicine for RA treatment in Ningxia. In early experiments, anti-RA effect of was confirmed and several potential active compounds were isolated. But the weak activity of these ingredients alone could not yet well explain the anti RA efficacy of Tamarix ramosissima. On the basis, we propose anti-RA activity of Tamarix ramosissima may be contributed by a combination of effective substances. To identify the effective substances in this combination, we propose to figure out ingredients moving into the blood after the administration of Tamarix ramosissima extract, testing anti-RA effect of drug-containing plasma on fibroblast-like synoviocytes, and systematically analyze the relationship between blood ingredients and drug-containing plasma activity in different time point. Then target ingredient knockout method will be used for optimization of the effective substances combination. Finally the activity of the combination will be tested in rat RA model to confirm the anti-RA effect, and it's mechanism will be discussed. This project will provide scientific basis for the exploitation of Tamarix ramosissima, and show great significance in the development of anti-RA drug and modernization of Hui medicine.

类风湿关节炎（RA）发病率和致残率高，严重威胁人类健康。回药红柳是宁夏回族群众常用的一种治疗RA的民间用药，课题组在动物实验中证实了红柳的抗RA作用，并在化学成分研究中得到了部分有效成分，但这些成分单独作用活性较弱，尚不能很好的解释红柳抗RA药效。由此我们提出红柳抗RA活性可能为多种成分组成的药效物质组合共同作用产生。为明确该药效物质组合，本课题采用血浆药物化学和血浆药理学相结合的方法，利用液质联用技术对红柳提取物给药后动态入血成分进行分析，建立不同时间点含药血浆指纹图谱，采用成纤维样滑膜细胞模型对不同时间点含药血浆药效进行测试，结合谱效关系分析来寻找抗RA药效物质组合，并利用目标成分敲除策略对组合进行优化，最后在细胞和动物实验中验证该组合的药效并探讨其抗RA作用机制。本课题可为红柳的药用开发提供科学依据，对抗RA新药研发和回药研究现代化具有重要意义。

类风湿关节炎（RA）发病率和致残率高，严重威胁人类健康。回药红柳是宁夏回族群众常用的一种治疗RA的民间用药，当前有关红柳药效物质基础方面的工作还很缺乏，对红柳抗RA活性成分认识不清，这些问题对红柳在抗RA方面的应用和进一步开发利用均造成了严重制约，因此开展红柳抗RA药效物质基础研究具有重要的理论意义与实际价值。本课题基于谱效关系学理念，采用血浆药物化学和血浆药理学相结合的方法，利用高效液相-质谱联用手段对红柳提取物给药后动态入血成分进行系统分析；利用类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）建立体外细胞模型，对红柳含药血浆抗RA活性进行测试，结合不同时间点入血成分图谱变化与含药血浆活性变化的相关性即谱效关系来寻找抗RA药效物质组合，利用目标成分敲除策略对组合进行确认和优化，最终明确了异阿魏酸、3, 3'-二甲基鞣花酸、槲皮素、槲皮素-3',4'-二甲醚、山奈酚为红柳含药血浆药效物质组合中的主要活性成分，反-N-阿魏酰酪胺、反-N-阿魏酰基-3-O-甲基多巴胺为药效物质组合中的药效相关成分，可能通过协同作用对药效做出贡献。其后在整体动物实验中对筛选出的药效物质组合的药效进行了验证，结果表明该药效物质组合可明显抑制RA模型大鼠的足跖肿胀，升高大鼠的压力耐痛值，同时使大鼠血清中炎症因子含量显著下降。最后利用细胞模型初步探讨了红柳药效物质组合的抗RA作用机理，结果显示，红柳药效物质组合能够通过调节凋亡通路关键蛋白的表达和促进caspase 9和caspase 3的裂解活化，从而显著促进RA-FLS细胞的凋亡，还能够使细胞周期阻滞于S期；另一方面，红柳药效物质组合对TNF-α诱导的RA-FLS细胞多种炎症因子释放和炎症因子相关基因表达均有明显的抑制作用。本课题将传统回族医药理论与现代技术手段相结合，对促进回医药的发展和回药研究现代化具有重要意义。基于入血成分谱效关系的研究方法可为中药和民族药物的药效物质基础研究提供思路，同时为新型治疗类风湿性关节炎药物研发以及红柳的开发利用提供理论基础和实验依据。