益肾清利活血组方调节自噬干预脂代谢紊乱肾损伤的机理研究

Autophagy plays an important role in the development of chronic kidney disease(CKD).Lipometabolic disturbance is known as one of the progressive risk factors of CKD .Our previous studies demonstrated that tonifying kidney-clearing- activating blood therapy(TKCABT) can retard progression of CKD. The regulation of AMPK on autophagy is possibly underlying the protection of TKCABT. So we hypothesis that TKCABT improve hyperlipomia-induced renal injury via regulation of autophagy. In this study, renal tubular epithelial cell line will be involved to investigate the regulatory role of autophagy and the protection of TKCABT in palmitic acid-induced cell damage in vitro. In vivo, high fat diet- and palmitic acid intravenous injection-induced hyperlipomia-elicited kidney injury model in SD rat are established respectively. The sample of serum, urine, and kidney tissue will be collected to evaluate the effectiveness of TKCABT and role of autophagy in kidney damage. Patients with hyperlipomia in NS will be enrolled, the serum level of palmitic acid will be detected to analyze the association with progression of CKD and cardiovascular event. In general, we will clarify the therapeutic mechanism of TKCABT and provide novel target for the treatment of CKD.

自噬在慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）的发生发展中发挥着重要的作用，脂代谢紊乱是慢性肾脏病发生发展的重要因素之一，在心血管疾病中，自噬与脂代谢紊乱密切相关，在CKD中，两者关系尚未明确。我们前期研究显示益肾清利活血组方具有较好的治疗CKD的作用，其作用机制可能与AMPK对自噬的调节有关。因此，本项目利用脂代谢紊乱导致的肾损伤体内外模型，明确自噬在脂代谢紊乱肾损伤中的作用，阐明益肾清利活血组方通过调控自噬治疗CKD的作用与机理，同时检测肾病综合征不同病理类型患者血清软脂酸水平，分析脂代谢紊乱特点，研究其与尿蛋白水平、肾功能、心血管事件的关系。通过本项目，将明确益肾清利活血法通过调控自噬改善脂代谢紊乱治疗肾脏病的作用和机理，为CKD的治疗提供新的靶点与中医药治疗手段，为治疗CKD提供新策略。

研究表明，脂代谢紊乱是慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)发生发展的重要因素之一，自噬在慢性肾脏病的发生发展中发挥着重要的作用，在心血管疾病中，自噬与脂代谢紊乱密切相关，在CKD中，两者关系尚未明确。益肾清利活血方是孙伟教授基于“肾虚湿瘀”理论创立的治疗慢性肾脏病的经验效方，临床疗效显著。我们前期研究显示益肾清利活血方具有较好的治疗CKD的作用，其作用机制可能与AMPK对自噬的调节有关，但对于此方的具体有效成分以及作用机理尚未明确。我们在体外研究发现，软脂酸能激活caspase-3诱导肾小管上皮细胞的凋亡造成损失，同时我们发现软脂酸能成浓度及时间依赖性的增加细胞自噬水平，诱导LC3I 向LC3II转化，而益肾清利活血方有效成分大黄酸能显著抑制LC3的表达，机制探讨中证实大黄酸可以抑制软脂酸诱导的AMPK蛋白的磷酸化，增加mTOR等蛋白的表达，单独作用于肾小管上皮细胞并不会产生影响以上蛋白的表达，以上结果提示大黄酸是通过调控AMPK-mTOR信号通路调节自噬，改善软脂酸诱导的肾小管细胞损伤。此外，我们通过阿霉素建立蛋白尿肾损伤体内模型，发现益肾清利活血方主要成分黄葵总黄酮能改善阿霉素诱导的蛋白尿肾损害大鼠的一般状态、生化指标、减轻肾组织病理损伤，拮抗NLRP3炎症小体的活化减少大鼠肾脏中caspase-1、IL-1β等炎症相关蛋白表达。在后期的深入研究中，我们通过体外研究证明黄葵总黄酮通过调节ERK1/2-NLRP3信号通路发挥肾保护作用。我们建立了阿霉素诱导的NRK-52e细胞蛋白尿肾损害模型，发现黄葵总黄酮可以抑制阿霉素诱导的氧化应激，机制探讨中证实黄葵总黄酮可以抑制阿霉素诱导的ERK蛋白的磷酸化介导的NLRP3、caspase-1、IL-1β等蛋白的表达，以上结果提示黄葵总黄酮是通过调控ROS-ERK1/2-NLRP3信号通路改善阿霉素诱导的肾小管细胞损伤。我们的研究证明益肾清利活血方能调控多靶点、多通路减轻慢性肾脏病的进展，结合我国中药资源丰富，价格低廉、安全有效、不良反应少等优势，具有极大的社会效益及经济效益。