清肝滋肾法上调SIRT1改善脂肪组织微环境干预高血压代谢紊乱的机制研究

Hypertension is usually associated metabolic abnormalities which increase the risks of cardiovascular diseases. The abnormal fat plays an major role in the metabolic abnormalities of hypertension. SIRT1 is an important molecular for modulating metabolism of fat and body. Qingganzishen( Zhen Jian granule) is one of experimental methods by Tang Shuhua, the famous old TCM doctor in Jiangsu hospital of TCM. Both clinical and animal studies had showed the effect of lowering blood pressure and improving metabolic abnormalities, but mechanism is not clear. So our hypothesis is that the down-regulation of SIRT1 expression which caused abnormalities of micro-environment of adipose tissue is the major pathophysiological mechanism in metabolic abnormalities and the treatment of effect by method of Qingganzishen is through up-regulation SIRT1 and improving adipose tissue micro-environment. Based on the hypothesis, we will use two kinds of SHR with metabolic abnormalities by high fat diet and adipose specific siRNA induced SIRT1 down expression and want to study the effect of Qingganzishen on the expression and activity of SIRT1 in adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Furthermore, we want to study the action and activity of nuclear receptors, transcript factors and enzyme and involved in the signal pathway by Western Blot, Elisa and q-PCR et al. From mRNA, protein and cellular and histomorphological levels, we will try to explore the mechanism of Qingganzishen on improving metabolic abnormalities in hypertension via multi-levels and targets methods.

高血压常合并代谢紊乱，并由此显著增加心血管风险。高血压时脂肪因子和细胞因子异常表达导致脂肪组织微环境紊乱，SIRT1是决定脂肪和整体代谢重要调节分子。清肝滋肾法（针箭颗粒）是我院名老中医治疗高血压代谢紊乱常用方法，前期研究证实了其降压及改善代谢紊乱作用，但机制不明。据此我们提出科学假说：内脏脂肪SIRT1下调导致脂肪组织微环境异常是高血压代谢紊乱的主要病理机制，清肝滋肾法（针箭颗粒）通过上调SIRT1，改善脂肪组织微环境，有效治疗高血压代谢紊乱。根据以上假说，本研究采用高脂诱导和脂肪特异性慢病毒转染两种SIRT1表达下调的SHR代谢紊乱模型，探讨清肝滋肾法（针箭颗粒）对内脏脂肪组织及3T3-L1前脂肪细胞中SIRT1的表达、活性及作用相关信号通路、转录因子、核受体、激酶等的调控作用，从基因转录、蛋白水平及细胞、组织形态等不同层次探讨这一方法改善脂肪组织微环境，干预高血压代谢紊乱的作用机制

高血压常合并代谢紊乱，并由此显著增加心血管风险。高血压时脂肪因子和细胞因子异常表达导致脂肪组织微环境紊乱，SIRT1是决定脂肪和整体代谢重要调节分子。清肝滋肾法是我院名老中医治疗高血压代谢紊乱常用方法，针箭颗粒是我院长期运用于临床的改善高血压代谢紊乱的有效方剂，本研究通过体内实验证明了清肝滋肾中药（针箭颗粒）可以明显降低高脂喂养的自发性高血压大鼠的收缩压、舒张压、平均动脉压；抑制其肝脏脂肪样变性；减轻其体重、附睾白色脂肪组织重量、附睾白色脂肪组织重量/体重%、脂肪组织体积、脂肪细胞的面积、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、血清胰岛素、OGTT、肝脏组织内甘油三酯、血清和附睾白色脂肪组织局部AngII（angiotensinogen）、TNF-α、IL-6、PAI-1、Leptin及血清resistin、 visfatin的水平；升高其高密度脂蛋白胆固醇及血清和附睾白色脂肪组织局部adiponectin水平。通过后续的机制研究，我们发现这一系列现象可能和清肝滋肾中药（针箭颗粒）可以有效恢复甚至提高高脂喂养导致的内脏白色脂肪和肝组织中Sirt1及其下游FOXO1的mRNA和蛋白表达的下调，并能有效抑制高脂饮食诱导的Sirt1下游PPARγ、C/EBPα、FABP4、acetyl-NF-кB-p65、PTP1B和Caspase1的mRNA和蛋白表达的上调有关。.此外我们还采用了经典的MDI诱导的3T3-L1细胞模型进行体外实验，我们首先发现50-300 μg/ml的针箭颗粒可有效抑制MDI诱导的3T3-L1细胞分化过程中的脂质聚集。通过后续的机制研究我们发现这一系列现象可能和针箭颗粒可以明显提高MDI诱导分化过程中3T3-L1细胞Sirt1及其下游adiponectin、FOXO1的mRNA的表达，并能有效抑制MDI诱导分化中Sirt1下游PPARγ、C/EBPα、FABP4、Leptin和PTP1B的mRNA表达的上调有关。.课题组经过4年的努力，已完成拟定的研究计划。通过本项目的研究，我们阐明了清肝滋肾中药（针箭颗粒）可以通过SIRT1调控脂肪组织微环境相关细胞信号通路中转录因子、核受体、激酶等表达及活性，促进糖脂代谢，调节脂肪因子分泌失调、抑制脂肪组织炎症，从而改善高血压代谢紊乱，为中药治疗高血压代谢紊乱提供了进一步的药理学证据 。