肝脏ACE-AngⅡ-AT1受体轴/ ACE2-Ang(1-7)-Mas轴对肝内细胞EMT/MET的调控作用：肝纤维化的新机制

上皮-间质表型转换（EMT）/间质-上皮表型转换（MET）是慢性肝损伤再生修复和纤维化的热点问题。肝内细胞经EMT转化为成纤维细胞，是肝纤维化的重要事件。新近发现，促肝纤维化的重要物质-血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可诱导肾小管上皮细胞EMT。然而未见AngⅡ及其抑制物-ACE2和Ang（1-7）调控肝内细胞EMT/MET的报道。本前期研究首次发现，AngⅡ可诱导人肝细胞EMT；Ang(1-7)对EMT有抑制作用。为此我们提出以下假说：AngⅡ可诱导肝内细胞EMT从而促进肝纤维化形成；ACE2和Ang(1-7)可抑制EMT，并诱导肝细胞来源的成纤维细胞MET从而促进肝再生。为了证实该假说，拟观察AngⅡ对肝内细胞 EMT的诱导作用；ACE2和Ang（1-7）对EMT的抑制作用，以及能否促使肝细胞来源的成纤维细胞经MET回复为肝细胞表型。本研究为抑制肝纤维化和促进肝再生修复提供新靶标和干预策略。

本课题从体内、外探讨AngII对肝细胞EMT影响，以及EMT与肝纤维化关系；观察 ACE2-Ang1-7-MAS轴对AngII诱导的EMT负性调控作用及机制。观察AngII对肝细胞凋亡影响。 体内研究发现，持续腹腔注射AngII可激活Smad信号通路，引起肝组织中间质标志蛋白I 型胶原表达升高、上皮标志蛋白E-cadherin减少。免疫荧光双染显示，AngII处理组同时表达FSP-1+白蛋白、白蛋白+ I 型胶原的细胞显著增多，说明AngII可能在体内诱导肝细胞发生EMT。但是由于检测技术限制，目前国际上无法直接观察体内肝细胞发生EMT过程。值得注意的是，我们发现持续腹腔注射AngII可诱导肝内细胞凋亡增多，提示AngII在肝脏既可以诱导肝内细胞发生EMT，又能诱导肝内细胞发生凋亡，其机理值得进一步深入研究。同样，免疫荧光及Western blot检测显示，BDL诱导肝纤维化的肝组织中，肝细胞白蛋白、E-cadherin表达减少，而I 型胶原、Vimentin等蛋白表达显著升高。因此，可以认为肝脏纤维化过程中可能伴随着肝细胞EMT，由于目前检测技术的限制，还无法直接观察到BDL大鼠肝细胞发生EMT的现象。此外，我们首次发现持续腹腔注射Ang1-7可抑制BDL大鼠肝纤维化，同时抑制BDL大鼠肝组织中vimentin 、I 型胶原表达上调，促进BDL大鼠肝组织中E-cadherin表达增高。提示Ang1-7可抑制BDL诱导的肝内细胞EMT发生，可能是Ang1-7抗肝纤维化的新机制。体外研究中，本课题进一步观察AngII对肝细胞EMT影响。研究发现AngII通过激活Smad、ERK/RhoA/ROCK信号通路诱导肝细胞发生EMT，同时AngII可使肝细胞凋亡显著增加，但是凋亡与EMT之间的关系、这两种现象与细胞周期之间的关系还未阐明，值得进一步研究。ACE2、Ang1-7作为AngII的拮抗物质，可以通过下调Smad信号通路，部分抑制AngII诱导的EMT，稳定肝细胞生物学功能，具有一定保护作用，但其对肝细胞凋亡及细胞周期影响未深入研究，这也是本课题需要进一步深入研究方向。结论：AngII 可通过上调Smad、ERK/ RhoA/ROCK信号通路诱导肝细胞发生EMT，且诱导肝细胞凋亡增加；ACE2-Ang1-7-MAS轴可拮抗AngII的上述作用，维持肝细胞生物学功能。