复方861调控肝纤维化大鼠肝脏局部ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的研究

瘀血为肝纤维化的病机关键，肾素-血管紧张素系统经典轴ACE-AngⅡ-AT1R激活与肝纤维化发生密切相关。我们既往研究证实，复方861通过抑制肝脏ACE-AngⅡ-ATR1轴发挥其活血化瘀抗肝纤维化作用。新近研究表明，ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴反向调节经典ACE-AngⅡ-AT1R轴，具有抗肝纤维化作用。本项目旨在应用分子生物学等方法研究复方861对胆管结扎肝纤维化大鼠肝脏局部ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的调控作用：(1) 复方861对ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的调控作用：观察其对肝纤维化大鼠肝脏ACE2、Ang(1-7)、Mas受体轴的影响；(2)明确复方861对ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的调控靶点：分别抑制ACE2和Mas受体，观察对复方861抗肝纤维化的影响，进一步明确该方的调控靶点。本研究将为活血化瘀治疗肝纤维化提供实验依据。

背景与方向:. 肝纤维化是各种慢性肝病进展中的损伤修复反应，以进展性炎症为特征，涉及多种肝细胞类型和激活多种信号传导导致了细胞外基质的沉积。最近研究表明在慢性胆源性肝病中，如原发性硬化性胆管炎，胆管上皮细胞也参与了胆源性纤维化的进展。目前尚无有效的方法治疗肝纤维化。许多实验证实肾素血管紧张素系统( rennin angiotensin system, RAS)在肝纤维化的进展中起至关重要的作用。RAS的靶向治疗可能成为慢性肝病的抗纤维化防治中非常有前途的模式。本课题观察大鼠肝纤维化模型肝脏局部RAS系统的经典轴ACE-AngⅡ-AT1和新轴ACE2-Ang-(l-7)-MAS受体轴的变化，并研究几种抗纤维化药物对肝纤维化大鼠体内两个轴的影响，观察其可能上调ACE2的表达，并通过ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴对肝纤维化的发生起作用。.主要内容:. SD大鼠随机分组 组1（G1）假手术对照组，组2（G2）胆管结扎模型组，组3（G3）复方861治疗组 胆管结扎+复方861 6g/kg/天，组4（G4 ）配方中药治疗组 胆管结扎+配方中药9g/kg/天，组5（G5）替米沙坦治疗组 胆管结扎+替米沙坦8mg/kg/天，组6（G6 ）雷米普利治疗组 胆管结扎+雷米普利1mg/kg/天。生化指标、病理评估。实时荧光定量PCR检测肝脏组织RAS成分及TGFβ、 III型胶原（col III ）mRNA的表达，Western-blot方法测定ACE、AT1、ACE2、Mas目的蛋白质在肝脏表达，免疫组化测定ACE、ACE2目的蛋白质在肝脏的定位及表达。以及酶联免疫吸附试验方法检测大鼠血清中血管紧张素II（AngII）和血管紧张素1-7 （Ang(1–7)）的含量。.重要结果及关键数据：. 药物治疗组大鼠肝脏局部RAS成分ACE和AT1mRNA表达水平及蛋白表达水平较胆管结扎模型组降低，而ACE2、Mas受体mRNA表达水平及蛋白表达水平均较胆管结扎模型组升高，P＜0.05；药物治疗组AngⅡ和Ang(1-7)水平与胆管结扎大鼠模型组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。.科学意义:.　　　揭示了复方861抗纤维化可能是通过ACE2上调ACE2-Ang(1-7)-Mas轴Mas受体的表达而发挥其作用，并将中药疗效分别与西药替米沙坦和雷米普利对比