基于生物热动力学表征的中药注射剂无菌检查新方法研究

中药注射剂临床疗效确切，但近年来不良反应事件频发。究其原因，产品质量、临床合理用药和生物个体差异是问题的聚焦点，其中微生物污染是导致产品质量不合格，引发不良反应的重要诱因之一。现行无菌检查法主要存在的不足：（1）检查时间长，至少需要14-21天；（2）灵敏度低，采用肉眼法观察是否变浑浊；（3）假阴性现象，如白色念珠菌等污染物不引起培养基浑浊；（4）易出现二次污染；（5）培养基繁杂，检查效率低。本项目首次将生物热动力学方法引入中药注射剂无菌检查中，以茵栀黄注射液为模式药物，采用生物热动力学参数判断是否有微生物污染，以生物热活性指纹图谱辨识微生物，建立一种快速灵敏、实时在线的中药注射剂无菌检查新方法，以期为微生物的快速检出和污染源及时判断提供技术支持，同时也为其他无菌制剂检查方法的建立提供技术参考。

无菌检查是无菌制剂生产过程中的必检项目和限速步骤，现今的无菌检查方法通常需要14-21d，极大延长了生产周期，亟需开发新的快速、准确的无菌检查方法。本研究建立基于生物热活性指纹图谱技术的注射液微生物源污染快速检查方法，进行了方法学考察，可表征无菌检查过程信息兼具微生物溯源性；项目同时开发了适用于微量热无菌检查方法的全封闭集菌安瓿培养器，并验证了方法及设备的可行性与适用性，项目达到了预期研究目的。.（1）以药典无菌检查方法学考察的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等为阳性控制菌，以生物热动力学参数生长速率k≥0及热功率差值大于3为判定指标，对新建无菌方法的灵敏度、检测时间、培养基等进行方法学考察。结果表明：①在35℃下、采用硫乙醇流体培养基，可在18h内检出小于10 cfu的各类微生物，符合药典无菌检查灵敏度要求，检出时间优于药典法（14d）；②能够检出小于10cuf的白色念珠菌污染，克服药典肉眼观察法难以检出的局限，避免假阴性现象；③新建方法可体现微生物生长过程特征信息，兼具微生物溯源性，可初步区分上述不同微生物种类，有助于快速锁定污染源。.（2）采用新建方法对不同灭菌状态（正常样品、未灭菌样品、灭菌不彻底样品、过度灭菌样品）对复方茵陈注射液样品进行方法适用性考察。结果表明，生物热动力学无菌方法能够区分复方茵陈注射液未灭菌样品、灭菌不彻底样品，方法较常规方法灵敏快速。.（3）开发了全封闭集菌安瓿培养器，进行了系统适用性考察，建立了微量热无菌检查工作方法草案，建立了全封闭集菌安瓿培养器操作流程，保证了方法的可行性、科学性和准确性。