调节性B细胞在重症肌无力中病生理作用和治疗意义的研究

近年刚发现的调节性B细胞（Regulatory B cells，Bregs）为能分泌IL-10的CD1d+CD5+双阳性B细胞，其在重症肌无力（Myasthenia Gravis，MG）中的作用尚无报道。我们课题组前期工作发现，MG患者Breg减少；而那些对CD20单抗的B细胞删除治疗疗效反应不同的MG患者，Breg数量截然不同。本项目中我们将证实：Breg在MG中可能有重大下调自身免疫反应的功能，且与疾病发生发展密切相关；Breg可作为理解免疫调节治疗机制和评估其疗效的重要指标。本项目将检测健康人和MG患者Breg的表型、特性，明确Breg在MG疾病发生发展中的作用及其与病情特点的相关性；利用B细胞删除疗法研究Breg特性，明确其在免疫调节治疗中疗效评价的意义；探索Breg扩增的最佳条件，分别进行离体和MG模型鼠在体实验评估扩增后的Breg的功能，为建立基于Breg的MG新疗法奠定基础。

背景：调节性B细胞（Regulatory B cells, Bregs）是一种能分泌IL-10的CD1d+CD5+双阳性B细胞，其在重症肌无力(Myasthenia gravis, MG)中的作用尚未可知。研究内容：AChR抗体检测建立及在MG诊断及临床意义；MG患者Breg细胞的表型、频率及功能研究及与疾病活动性的关系；Breg恢复率在利妥昔单抗治疗不同反应的MG患者中的变化；实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis, EAMG)鼠中及对抗鼠CD20单抗删除治疗后Breg细胞变化；外源性IL-21对Breg细胞分泌IL-10的影响；抵抗素水平在MG患者中的变化；建立视神经脊髓炎谱系疾病（Neuromyelitis optica spectrum disorders, NMOSD）中AOP4-Ab检测平台，探索AQP4-Ab与疾病活动性的相关性；利妥昔单抗治疗后NMOSD患者的B细胞及亚型的变化、临床症状、复发率的、影像改变；MG、NMOSD及MS中嗅觉功能研究。结果及数据：胎儿型及成人型AChR抗体提高检测敏感性，两种亚型均阳性的MG提示向全身型转换可能性大。MG患者较健康对照外周血中Breg细胞数量减少。Breg细胞数与MG疾病严重程度负相关，MGFAIII及IV型MG患者外周血Breg细胞较I及II型明显低。MG患者外周血Breg细胞的恢复程度与B细胞删除治疗的疗效有关。对B细胞删除治疗反应良好的患者中外周血Breg细胞恢复率较快。EAMG 小鼠分泌 IL-10 的 CD1d+CD5+CD19+B 细胞减少。用抗鼠CD20单抗治疗EAMG小鼠，治疗组外周B细胞较对照组分别减少。外源性IL-21可抑制 CD5+CD1d+CD19+B 细胞分泌 IL-10。血清抵抗素在全身型和合并胸腺瘤的MG患者中升高，与疾病的严重程度相关。AQP4抗体水平与NMOSD患者疾病活动性相关。利妥昔单抗治疗NMOSD患者有效，患者临床症状、复发频率及影像学均有所改善。不同治疗中B细胞亚型在NMOSD患者外周血中及抗体滴度均有一定变化。在MG、NMOSD、MS中均有不同程度的嗅觉功能障碍。科学意义：明确Breg细胞在抗体介导的自身免疫疾病，MG和NMO中的变化及对疾病活动性和治疗的指导意义，为后续研究奠定基础。