病毒miRNA参与慢性鼻窦炎鼻息肉炎症反应发病机制的研究

For ineffective treatment of nasal polyps, the fundamental reason is that its pathogenesis still remains unclear so far. Now it is widely recognized thatbacteria, fungi and other microorganisms play important inducing roles in the pathogenesis of nasal polyps. As the study on diseased microbial environment deepened, the role of viral infections on the pathogenesis of nasal polyps has gained attentions again in recent years and is developing rapidly. The extracted kshv-miR-K12-7 and ebv-miR-BART2-5p (adjustable IL-6, IL-10) of two viral miRNAs from the microarray results of the pre-miRNA are used to carry out preliminary experiments of qPCR verification, based on which, we hypothesize that: probably viral miRNA is also involved in affecting and regulating the occurrence and development of nasal polyps. The project aims to: study comprehensively and intensively the relationship between viral miRNA and key immune cytokines in the pathogenesis of nasal polyps, as well as signal transduction proteins by using fluorescence quantitative PCR, fluorescence in situ hybridization techniques and liquid phase microarray analysis platform luminex. While illustrating and perfecting microbial immune regulatory mechanisms of nasal polyps, the project will probably provide theoretical support and assistance for new prevention and treatment methods of nasal polyps in the future.

鼻息肉治疗效果不佳，根本原因在于其发病机理迄今为止仍不清楚。目前普遍认为细菌、真菌等微生物在鼻息肉的发病过程中具有重要的诱导作用。病毒感染在鼻息肉发病过程中的作用， 近年再次受到重视，并飞速发展。在对前期miRNA芯片结果中，抽取的kshv-miR-K12-7，ebv-miR-BART2-5p （可调控IL-6，IL-10）两个病毒miRNA进行qPCR验证预实验后，我们推测：很可能病毒miRNA也参与影响和调控了鼻息肉的发生发展。本项目旨在：利用荧光定量PCR，荧光原位杂交技术，液相芯片分析系统平台luminex，全面深入地了解病毒miRNA 和鼻息肉发病机制中重要的免疫细胞因子，信号转导蛋白之间的关系，并通过转染目标病毒miRNAmimic至细胞了解其调控机制。在完善阐明鼻息肉微生物免疫调控机制的同时，还可能对将来鼻息肉的预防和治疗提供新靶点的理论支持和帮助

背景：鼻息肉 (NP, nasal polyp) 是耳鼻咽喉头颈外科的常见病之一。目前在临床上，虽然治疗手段不断进步，但其疗效仍不能令人满意。迄今为止，有关鼻息肉发病机理的研究仍未完全明了，尽管学者们提出了参与鼻息肉发病的各种病因及机制的理论，但仍无一个致病因素能完全阐明鼻息肉的病理和临床表现。主要研究内容：（1）采用miRNA芯片(miRN Aarray)方法,鼻息肉（n=12）和正常鼻粘膜（n=6）的miRNA的表达谱进行检测。（2）利用Heatmap，miDB等数据库对芯片数据进行分析，筛选差异化病毒miRNA。（3）用实时定量(real-time) 逆转录聚合酶链反应，对目标病毒miRNA在鼻息肉（n=49）和正常鼻粘膜（n=32）中的表达进行定量分析。（4）采用荧光原位杂交技术（FISH），并利用荧光显微镜技术，对经qRT-PCR验证后的病毒miRNA在鼻息肉（n=8）和正常鼻粘膜（n=3）中的定位进行分析。结果：miRNA芯片共筛查出78个病毒微小RNA在鼻息肉和正常鼻腔粘膜组织中有差异。（2）通过生物信息学数据分析筛选后得到19个重要的，在鼻息肉组织和正常鼻腔粘膜组织中存在差异的病毒miRNA。其中kshv-miR-K12-7、ebv-miR-BART2-5p 、hcmv-miR-UL70-3p 三个病毒miRNA存在较大明显差异(3)荧光实时定量PCR验证后，发现仅kshv-miR-K12-7、ebv-miR-BART2-5p在鼻息肉组织中明显增高。（4）荧光原位杂交结果提示，上述kshv-miR-K12-9病毒miRNA在鼻息肉组织中的上皮层及腺管上皮中高表达，而ebv-miR-BART2-5p病毒miRNA在鼻息肉组织中的上皮层及囊泡上皮中高表达，两者均在正常鼻腔粘膜组织中无表达或低表达。结论：病毒miRNA在鼻息肉和正常鼻粘膜组织中的表达存在差异。kshv-miR-K12-7病毒miRNA在鼻息肉组织中的上皮层及腺管上皮中高表达，通过抑制kshv-miR-K12-7 的表达，可以增强 AdipoR2 在鼻粘膜上皮细胞中的分泌与表达，可能由此从而发挥其抗炎，抗纤维化作用，抑制鼻息肉的形成。