广州管圆线虫趋向性移行机制研究

广州管圆线虫病作为一种新发传染病，引发了新的公共卫生问题。"入脑"是广州管圆线虫移行的必经之路。入脑后，正常宿主脑内幼虫能完成脑-肺移行，非正常宿主脑内幼虫却不能完成脑-肺移行。是什么因素驱使着幼虫的趋向性移行？又是什么因素阻断了非正常宿主内幼虫的脑-肺移行？本项目在成功构建感染大鼠（正常宿主）和小鼠（非正常宿主）模型的基础上，①拟根据宿主脑脊液和外周血成分差异选取不同物质及条件(钙、LDH、氧分压等)，对三期幼虫、感染大鼠与小鼠脑内幼虫进行体外趋化试验，寻找幼虫移行的趋化因子及可能的阻断途径。②拟对比分析感染大鼠与小鼠脑内幼虫的超微结构、水解酶谱及大鼠与小鼠脑内细胞因子和酶等效应分子（MMPs、PAs、IL-5等）、效应细胞及其凋亡基因表达差异，分析幼虫经受大鼠和小鼠免疫攻击后的形态与功能改变，选择效应分子进行体外验证与体内干预，阐明非正常宿主体内幼虫脑-肺移行阻断的效应分子和作用机制。

“入脑”是广州管圆线虫移行的必经之路。入脑后，适宜宿主脑内幼虫能完成脑-肺移行，非适宜宿主脑内幼虫却不能完成脑-肺移行。是什么因素驱使着幼虫的趋向性移行？又是什么因素阻断了非适宜宿主内幼虫的脑-肺移行？本项目围绕这两个科学问题展开了系列研究，并取得了以下成果：（1）建立了广州管圆线虫（AC）感染大鼠和小鼠模型及幼虫的体外培养体系，为国内多家单位提供了科研资源。（2）全面观测了不同宿主脑内幼虫形态与结构差异，证实了不同宿主脑内幼虫结构上无统计学差异，但小鼠脑内幼虫的发育程度明显阻滞，而且不同品系小鼠脑内幼虫的发育程度不同。（3）系统分析了不同宿主脑内幼虫的蛋白与明胶酶谱差异，发现不同宿主脑内幼虫的虫体与分泌蛋白以及明胶酶谱均存在差异；蛋白组学分析发现27个高分值的差显蛋白，其中大鼠脑内幼虫的钙结合蛋白比小鼠脑内幼虫高10倍，而小鼠脑内幼虫的细胞质tRNA2-巯基化蛋白-1、血管紧张素样肽-2、肌动蛋白-1/2/3、细胞色素P4504E3、氨基酸转运ARG-13、胶质纤维酸性蛋白等蛋白显著高于大鼠脑内幼虫，为进一步的功能研究奠定了基础。（4）揭示AC感染小鼠的抗体产生规律，IgE、IgA、IgM、IgG抗体随着感染时间推移和感染量的升高而升高；利用幼虫排泄分泌抗原构建的ELISA检测体系具有良好的早期诊断和现症感染诊断价值。（5）揭示了AC感染小鼠细胞免疫特征，AC感染引起小鼠IL-4、IL-5和eotaxin的水平升高以及IL-17和IFN-γ降低，外周血CD4+CD25+细胞比例升高，表现为以脾脏CD4+T淋巴细胞大量增殖和Th2型淋巴细胞极化特征，为AC致病与疫苗研究提供了基础。（6）分析了AC感染小鼠脑组织microRNA表达谱，发现AC感染小鼠脑组织中26个miRNAs明显下调，3个miRNAs出现明显上调，为进一步功能验证及基因调控研究提供了基础。（7）筛选了AC-L3体外趋化因子，发现100mM 的NaCl、CaCl2溶液对L3有趋向作用，而100mM的NaH2PO4溶液有趋避作用，为AC趋向性移行机制研究提供了基础。. 本项目已发表论文5篇（SCI论文1篇），尚有2篇论文正在整理中，研究结果作为部分内容获得2010广东省科技进步二等奖；培养硕士生4名（毕业2名）、博士生2名（毕业1名）、青年科技人员3名；应邀参加国际学术会议发言2次，广获好评。