功能性长链非编码RNA（LncRNA）与卵巢癌发生与发展的研究

As a new hot pot in tumor research, LncRNA is attracting more and more attention. Studies have shown that expressions of LncRNAs are different in a variety of tumors. However, most of the mechanisms aren’t clear. How to choose proper LncRNA for investigation is a problem. As, we know, the mortality of ovarian cancer accounts for the first place in gynecological malignancy.In preliminery experiments, using RNA-Seq technique, we found LncRNA-uc002yug.2 has a close relationship with ovarian cancer. Meanwhile, LncRNA-uc002yug.2 may affect alternative splicing of RUNX1 gene in the downstream. On the basis of about results, we are going to combine mechanisms exploring and phenotype function tests to clarify functional LncRNAs. This might help to elucidate mechanism of etiology and progression of ovarian cancer, and provide new insights for screening and prevention of ovarian cancer.

LncRNA 作为肿瘤研究中的新热点正在引起越来越多的关注。研究表明，LncRNA 在不同肿瘤中表达上存在差异，然而绝大多数LncRNA的作用机制尚不清楚。如何选择适当的LncRNA作为研究的突破口是个难题。卵巢癌病死率位居妇科恶性肿瘤首位。在前期研究中，我们采用基于二代测序的RNA-Seq技术进行高通量检测，发现了LncRNA-uc002yug.2与卵巢癌密切相关，并极可能影响了其下游的RUNX1基因的可变剪切。拟在此基础上，联合功能表型实验和机制研究等方法，探讨功能性LncRNA对周边及下游基因的影响，进一步阐明卵巢癌发病机制，为卵巢癌筛查和防治提供新的途径及方法。

项目背景：卵巢癌患者死亡率位于妇科恶性肿瘤患者之首，其中以上皮性卵巢癌最为常见。尽管手术与放化疗被广泛应用，由于卵巢癌具有早期诊断困难以及晚期患者复发率高的特点，病死率依旧居高不下。许多研究都证实，lncRNA的表达具有高特异性，有望为肿瘤的早期诊断和治疗提供新的分子靶标。目前， 针对卵巢癌相关的lncRNA的研究依旧非常有限。.主要研究内容：获得2007年1月至2017年1月在北京大学第三医院妇产科住院的27例卵巢癌患者和10例卵巢良性病变患者的组织样本。利用Aligent Human LncRNA基因芯片，分两次检测其中5对卵巢癌癌组织及癌旁组织中LncRNA与mRNA的表达情况，筛选出差异表达的lncRNA与mRNA。根据基因差异倍数筛选LncRNA，在22例卵巢癌组织和10例正常卵巢上皮组织样本中，利用RT-qPCR验证LncRNA的差异表达。进一步，利用siRNA技术在卵巢癌细胞SKOV3中敲低目标LncRNA后，了解细胞功能的变化，并检测其相关基因的表达。.重要结果：利用基因芯片，在五对癌-癌旁组织内筛选出千余条差异表达的lncRNA和mRNA。可见，和正常卵巢上皮组织相比，上皮性卵巢癌组织lncRNA表达谱具有非常显著的表达差异。基于差异倍数，分两次筛选出数条lncRNA，并利用RT-qPCR验证其表达水平。其中LINC00152，NR2F2-AS1，KRT18P55，EPB41L4A-AS1得到RT-qPCR的验证。在分析临床数据后发现，其中，NR2F2-AS1在卵巢癌组织中表达下调，该下调在早期（Ⅰ-Ⅱ期）卵巢癌组织中相比晚期（Ⅲ-Ⅳ期）更明显。LINC00152在卵巢癌组织中表达上调，该上调在晚期（Ⅲ-Ⅳ期）卵巢癌组织中相比早期（Ⅰ-Ⅱ期）更明显。并且利用siRNA抑制NR2F2-AS1在卵巢癌细胞SKOV3中的表达，可导致其反义基因NR2F2的mRNA水平下调，并显著提高NR2F2相关基因Smad7和TGFB1的mRNA水平。利用siRNA抑制LINC00152在卵巢癌细胞SKOV3中的表达，可影响细胞增殖和细胞周期。.科学意义：本研究首次对lncRNA：NR2F2-AS1以及LINC00152在上皮性卵巢癌内的表达特点进行了探索。进一步的研究将有利于解析卵巢癌的病理机制，并有可能挖掘出新的肿瘤标记物和治疗靶点。