20-HETE损伤血管内皮细胞促进血栓形成的作用及机制研究

最新研究发现解热镇痛抗炎药COX-2抑制剂可显著提高花生四烯酸的代谢产物20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)的血浆浓度及20-HETE可明显缩短小鼠尾出血时间，提示20-HETE可能为其引起心梗等严重缺血性心血管事件的机制，但对20-HETE在凝血及血栓调节的作用及机制未深入探讨。血管内皮细胞(EC)在血栓形成中发挥重要作用。我们预实验发现，20-HETE可显著降低EC血栓调节素的表达、增加vWF的释放，因此提出20-HETE可损伤EC而参与促凝血和血栓形成。本项目拟以EC为切入点，在细胞水平（包括EC与血小板共孵育）研究EC内源性20-HETE及外源性20-HETE对EC的损伤作用和因此产生的对血小板粘附的影响及其分子作用机制及用转基因动物等多种不同处理的动物分别研究20-HETE对血栓形成的作用，为发现COX-2抑制剂引起心血管风险的机制做出贡献，并为未来该类药物的研发提供新思路。

20-HETE是花生四烯酸的第三条代谢通路，即CYP通路，的一个重要代谢产物，近十余年才被逐渐研究。20-HETE在凝血及血栓调节的作用及机制未深入探讨，而血管内皮细胞(EC)在血栓形成中发挥重要作用，因此本项目以EC为切入点，分别在细胞水平、动物水平（小鼠FeCl3血栓模型、糖尿病小鼠心血管并发症阶段）进行了研究。在细胞水平发现20-HETE可损伤血管内皮细胞，降低TM的表达、促进vWF的释放；进一步研究发现应用EDTA螯合细胞外Ca2+离子或阻断ERK1/2通路均抑制了20-HETE促进vWF释放的作用。离体（血管内皮细胞和血小板共孵育实验）和在体的血栓模型（小鼠FeCl3血栓模型）均发现20-HETE可通过损伤血管内皮细胞促进凝血、促进血栓形成。在糖尿病小鼠模型中发现，血浆中20-HETE水平显著升高，而应用两种不同的20-HETE抑制剂均可改善糖尿病小鼠TM和vWF的表达或释放，改善了eNOS和peNOS的表达，并抑制了糖尿病小鼠高血压的发展，提示20-HETE通过损伤血管内皮细胞参与糖尿病心血管并发症的发生。. 本研究结果提示20-HETE可通过损伤血管内皮细胞促进血栓的形成，其机制可能与促进细胞外Ca2+内流、激活ERK1/2通路进而促进vWF的释放有关。另外对糖尿病小鼠模型的研究发现糖尿病状态下20-HETE的血浆水平显著升高，血管内皮细胞受损， TM、eNOS、peNOS的表达显著降低、vWF的释放显著增多。. 本研究为发现COX-2抑制剂引起心血管事件的机制做了进一步探讨，另外提示临床糖尿病患者由于其血浆20-HETE水平可能已经升高，如果应用COX-2抑制剂可能更易于引发心血管事件，应谨慎应用、严密观察。