肝再生过程中质膜微区蛋白质及复合物动态变化研究

肝脏是具有极强再生能力的器官, 研究并阐明肝再生的机制可为肝移植等与肝损伤相关的疾病治疗提供理论依据，具有重要的临床意义和社会价值。脂筏是一种特殊的膜结构微区,具有参与胞吞胞饮、信号转导等重要功能。在细胞信号刺激下，脂筏能改变蛋白质的大小和组成，有助于特异的蛋白质与蛋白质之间的相互作用，从而导致信号转导通路的激活。肝再生过程中，随着血管生成以及细胞增殖的启动，质膜微区脂筏蛋白质将受到内部调控机制的影响而发生变化，捕获脂筏微区信号蛋白分布的动态变化对于理解和阐明肝再生过程中信号传导机制、信号通路途径等有着重要的意义。本项目拟通过研究大鼠2/3肝部分切除后在0、24、48、72hr时间点微区脂筏蛋白质及其复合物在肝再生过程中的定位变化、蛋白质数量上的变化和自身修饰的变化，阐述肝脏再生过程中质膜微区蛋白质的改变对信号传导、信号通路的影响，为探讨肝再生这一生理现象的发生发展机制提供理论依据。

肝脏是具有极强再生能力的器官, 研究并阐明肝再生的机制可为肝移植等与肝损伤相关的疾病治疗提供理论依据，具有重要的临床意义和社会价值。脂筏是一种特殊的膜结构微区,具有参与胞吞胞饮、信号转导等重要功能。在细胞信号刺激下，脂筏能改变蛋白质的大小和组成，有助于特异的蛋白质与蛋白质之间的相互作用，从而导致信号转导通路的激活。肝再生过程中，随着血管生成以及细胞增殖的启动，质膜微区脂筏蛋白质将受到内部调控机制的影响而发生变化，捕获脂筏微区信号蛋白分布的动态变化对于理解和阐明肝再生过程中信号传导机制、信号通路途径等有着重要的意义。本研究中，我们成功构建了高重复性的2/3部分肝切除模型，并且优化了两步胶原酶灌注分离再生肝实质细胞方法，分离得到高纯度高成活率的再生肝实质细胞。通过提取纯化肝切除后0小时，24小时，48小时，72小时的肝脏实质细胞的质膜，在此基础上进一步纯化得到了高质量的质膜微区及其脂质筏蛋白质，质谱鉴定结果显示获得了高可信度的微区蛋白质，表明本研究中富集肝实质细胞的方法为肝再生过程中质膜微区蛋白质的功能研究奠定了基础。随后通过对肝再生不同时间点的微区蛋白质进行itraq标记定量，我们获得了肝再生过程中质膜微区蛋白质的动态变化图谱。其中在四个时间点同时存在且差异显著的蛋白有277个，鉴定的差异显著的蛋白质主要参与信号传导、蛋白质转运和细胞连接等。蛋白质翻译后修饰在生命体中具有十分重要的作用，它使蛋白质的功能更为完善，调节更为精细。本研究运用一种特异性磷酸化蛋白染色的磷酸化蛋白分析技术，对磷酸化蛋白的动态变化进行了比较分析。同时利用建立的两种富集糖蛋白的方法（即生物素酰肼富集糖蛋白与生物素/亲合素富集糖蛋白），对肝切除后72小时后及其假手术组的肝脏血窦内皮细胞质膜糖蛋白进行了富集提取以及质谱鉴定分析。我们一共鉴定到150个糖蛋白中的231个糖基化位点，其中细胞表面抗原分子鉴定到23个，通过生物信息学分析揭示所鉴定到的蛋白大部分已知且与内皮细胞的生理及病理进程密切相关。我们的研究结果为探讨肝再生这一生理现象的发生发展机制提供了理论依据。