日本血吸虫感染肝肉芽肿中lncRNA AK165053对巨噬细胞ROR alpha通路的调控机制研究

The primary pathogenesis of Schistosoma japonicum infection is attributed to egg-induced granulomatous inflammatory response in the liver. Macrophages play essential roles in the granulomas. In our previous studies, we found that lncRNA AK165053 increased significantly, which in combination with ROR alpha and promoting Th17 differentiation, resulting in the granuloma formation.To clarify the mechanism of immne regulation of AK165053 by ROR alpha pathway in schistosome granulomas, we plan to investigate as follows: 1, the role of AK165053 in hepatic egg granuloma formation; 2, the role of ROR alpha in hepatic egg granuloma formation; 3,the possibility of inhibiting or reducing schistosome eggs granuloma formation by regulating the level of AK165053. This study would provide the theory basis for immunotherapy to hepatic granulomas in schistosomiasis.

日本血吸虫感染后最主要的致病作用是沉积在肝脏中的血吸虫卵所引起的肉芽肿。巨噬细胞是肉芽肿形成的必需因素。前期研究发现，日本血吸虫感染小鼠肝巨噬细胞中lncRNA AK165053显著升高，其可与转录因子ROR alpha结合，调控Th17细胞的分化和IL-17的分泌，促进肝虫卵肉芽肿的形成。因此提出假说：血吸虫感染引起肝脏巨噬细胞lncRNA AK165053表达上升，导致ROR alpha下调，加重病理性炎症反应，继而形成肝虫卵肉芽肿。本课题拟利用血吸虫体外及体内感染模型，研究AK165053对巨噬细胞ROR alpha通路的调控及其在肝虫卵肉芽肿形成中的作用机制，解决以下科学问题：1、AK165053在肝虫卵肉芽肿形成中的作用；2、ROR alpha在肝虫卵肉芽肿形成中的作用；3、利用小鼠模型，探讨调节AK165053抑制或减轻血吸虫卵肉芽肿形成的可能性，为免疫治疗新途径提供科学依据。

巨噬细胞是日本血吸虫感染后肝脏虫卵肉芽肿形成的重要因子。前期研究发现随着虫卵肉芽肿的发展，小鼠肝脏中巨噬细胞的比例显著升高。进一步芯片检测发现，肝脏巨噬细胞LncRNA AK165053的表达显著升高，且与IL-17和Th17细胞的水平正相关。体外细胞实验发现，过表达AK165053后，巨噬细胞吞噬能力降低，TNF-α和TGF-β的表达显著升高，培养上清中炎性细胞因子 IL-1β、IL-17、IL-23的水平显著升高，流式检测Th17细胞的比例增高。. 我们分别通过RNA-pulldown和RIP实验证实AK165053和ROR alpha存在相互作用。双荧光素酶报告实验和免疫荧光实验显示AK165053能通过调节ROR alpha 3’端的加尾，降低其稳定性。AK165053过表达能造成ROR alpha总量的下降，影响其在细胞内的定位，尤其是细胞核内的定位，进而影响整个ROR alpha的信号转导。. 干扰ROR alpha后，巨噬细胞RAW264.7 TNF-α和TGF-β的表达显著升高，细胞因子IL-1β、IL-17、IL-23等显著增高，与CD4+CD45RA+细胞共培养后Th17细胞的比例增高。恢复ROR alpha的表达后，无论是细胞因子的表达，还是Th17细胞的分化均有所回降。这提示ROR alpha可能通过了一定的调控机制，参与了日本血吸虫感染后肝脏虫卵肉芽肿巨噬细胞的活化和Th17细胞的分化。. 通过日本血吸虫感染小鼠体内实验发现，干扰AK165053后小鼠肝脏病理损害减轻，Th17细胞比例减少，IL-17的表达水平下降。干扰AK165053对小鼠脾脏的影响较小，提示AK165053调节Th17的优势表达主要在病变肝组织发挥免疫病理损伤作用。. 本研究初步阐述了LncRNA AK165053通过调控肝脏巨噬细胞中ROR alpha进而调节Th17细胞的分化和IL17的表达，在肝虫卵肉芽肿发生发展中发挥重要作用，为进一步深入理解肝虫卵肉芽肿的致病机理、探讨免疫治疗新途径提供了新的思路。