孕烷X受体在大鼠肝缺血再灌注损伤与保护中的表达及其意义

拟采用重组DNA、基因转导和RNA干扰技术，以肝细胞A/R损伤与IPC保护为模型，在孕烷X受体(pregnane X receptor, PXR)蛋白正常表达、高表达（≥正常表达200％）和低表达（≤正常表达50％）以及MAPK酶抑制剂干预等不同情况下，观察肝细胞培养液中LDH与ALT活性变化、肝细胞MDA、SOD及GSH-Px表达和活性变化、线粒体膜电位、ROS活性、NF-kB活性及游离钙变化、肝细胞存活率及其凋亡情况、超微结构的变化等，并进行比较研究，来探讨PXR受体在肝A/R损伤或保护时的意义，及其与ROS系统、NF-κB、MAPK信号通路间可能的关系；以在体大鼠I/R与IPC保护为模型，给予PXR受体诱导剂地塞米松和非特异性阻断剂酮康唑等不同情况下，观察A/R损伤、IPC保护与PXR受体表达水平的关系；为进一步研究、探索肝A/R损伤的分子生物学机制，寻找新的药物作用分子靶点奠定基础

缺血再灌注损伤为肝部分切除术、肝移植、创伤、休克等主要并发症之一。探索肝缺血再灌注损伤的机制，寻找保护缺血肝细胞，增强机体耐受力的方法，是一项极待解决的临床课题，具有重要的理论意义和实用价值。孕烷X受体(pregnane X receptor, PXR) 是核受体超家族成员之一，参与药物代谢酶如CYP3A4和转运蛋白如P-gp等的转录调控作用。孕烷X受体炎症、缺氧、肿瘤等病理情况意义引起人们关注，但PXR是否参与肝细胞缺血再灌注损伤的保护作用目前仍不清楚。本研究采用PXR诱导剂克霉唑或RNAi预处理大鼠原代培养肝细胞后，建立缺氧/复氧损伤模型，测定PXR靶基因CYP3A1蛋白及MAPK通路蛋白表达，观察肝细胞培养液中LDH、ALT活性变化、MDA、SOD及GSH-Px活性变化、肝细胞NF-kB活性变化、肝细胞凋亡情况，肝形态学变化等，来探讨PXR蛋白在肝缺氧/复氧损伤时的意义及其与ROS系统、NF-κB、MAPK信号通路间可能的关系；在体大鼠缺血再灌损伤模型基础上，予以不同处理观察在体动物A/R损伤与PXR蛋白表达水平间的关系。结果表明：PXR特异性诱导剂克霉唑上调PXR、CYP3A1mRNA表达，具有较好抗肝缺血再灌注损伤的保护作用，其机制可能在PXR介导下，拮抗ROS损伤及内源性保护蛋白HSP70表达上调有关；另外，克霉唑预处理抗肝缺血再灌注损伤作用与PXR活化，上调ERK1/2表达，致抑凋亡基因Bcl-2表达上调，Bax、PARP表达下降，抗凋亡作用有关，也可能与PXR活化抑制NF-κB转录活性有关。以上结果表明PXR在肝缺血再灌注损伤损伤时的细胞内信号传递中发挥重要作用，将为进一步阐明肝缺血再灌注损伤和保护中的分子生物学机制奠定基础。. 对照研究工作计划，基本完成预定的研究工作，已完成在细胞水平孕烷X受体(pregnane X receptor, PXR)在缺血/再灌注损伤时的意义及其与HSP70、ROS系统、NF-κB、MAPK信号通路间的关系，进一步探讨其参与保护作用的机制，孕烷X受体在整体大鼠缺血/再灌注损伤与HSP70、ROS系统、凋亡基因之间关联性的研究。