乙肝病毒X蛋白突变体在肝癌发生中的作用及其分子机制研究

乙型肝炎病毒（HBV）的感染与肝癌的发生具有十分密切的关系。HBV X蛋白（HBx）在致癌中发挥着重要的作用。文献报道，在肝癌组织中可普遍检测到HBx发生突变，其突变频率高达76%。因此，HBx发生突变在肝癌发生中的作用和意义是一个重要的科学问题。我们实验室前期研究发现了一个新的HBx羧基端缺失的突变体（命名为HBx?127）。初步研究结果显示，该突变体比野生型HBx蛋白具有更强的促增殖和促迁移能力。本项目的主要研究内容有：阐明该HBx突变体在肝细胞转化中的作用及其分子机制；揭示该突变体与野生型HBx蛋白在功能上的差异及其分子机制。实验中采用分子生物学先进技术，如染色质免疫共沉淀、表观遗传学检测手段、microRNA调节、基因转染、克隆形成和动物成瘤等，观察该HBx突变体促进肝细胞转化以及促增殖促迁移能力增强的作用并阐明其分子机制。该研究将为阐明乙肝病毒致癌分子机制提供新的实验依据。

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein, HBx）是导致肝癌发生发展的重要因子。乙肝病毒经常发生突变，我们实验室研究前期发现了一个新的HBx突变体，与野生型HBx相比，该突变体具有更强的致癌作用。本课题围绕HBx突变体的致癌作用及其分子机制进行了深入细致的研究，其主要研究成果如下：.1.我们从60例肝癌病人的癌组织和癌旁组织中筛选到了HBx基因新的突变体，这些突变属首次发现，同时我们发现某些突变并未使HBx的促癌功能发生改变；.2.与野生型HBx相比，HBx127突变体能够明显上调miR-215的表达，进而miR-215可能通过靶向抑癌基因PTPRT发挥促进肝癌细胞增殖的功能，在细胞中验证PTRPT是否是miR-215的靶基因。并且通过Edu、克隆形成及接种裸鼠成瘤实验分析miR-215靶向的PTRPT在HBx127促肝癌细胞增殖中发挥作用；.3.研究发现HBx127可通过5-LOX上调OPN的表达，从而实现促进肝癌细胞迁移的功能。体外划痕实验显示，与HepG2-X细胞相比，HepG2-X127促细胞迁移的能力更强；.4.研究发现HBxΔ127 可通过 5-LOX 上调 FAS 的转录活性和SREBP-1c 的表达，进而促进肝癌细胞的增殖；进一步的实验发现，FAS 反过来又可可调节 5-LOX 的表达，进而以正反馈的形式促进细胞增殖。. 综上所述，本研究进一步揭示了乙肝病毒HBx突变体HBx127增强肝癌细胞增殖和迁移的分子机制，为治疗乙肝相关的肝癌提供了重要的治疗靶点。截止该项目结题，本课题组在《Hepatology》、《Oncogene》、《JBC》和《Carcinogenesis》等一系列国际高水平学术期刊上发表相关SCI论文16篇（此外，另有一篇BBRC修稿，待发表），其中SCI 15篇，在国内核心期刊发表论文1篇，培养博士研究生10名，硕士研究生11名。