乙肝病毒X蛋白诱导卵圆细胞向肝癌干细胞转化及其分子机制的研究

乙肝病毒X蛋白（HBx）是乙肝病毒诱导肝癌发生的关键因子，但具体作用机制尚不清楚。肝癌干细胞学说为进一步揭示HBV 相关的肝癌发生机制开辟了全新的路径，目前研究认为肝癌很可能是由作为肝干细胞的卵圆细胞异常分化所致。我们的前期研究发现HBx蛋白可上调ras信号通路的上游信号因子c-Src的表达，大量研究证实癌基因ras和c-myc二者共同在调控卵圆细胞生长分化和HBx蛋白诱导的肝癌发生中扮演关键角色。鉴于此，我们推测HBx蛋白可能通过激活癌基因ras和c-myc诱导卵圆细胞向肝癌干细胞转化。本项目拟分别以临床肝癌病人、卵圆细胞株和裸鼠为研究对象，采用基因转染、免疫荧光等技术和方法，通过体内、外实验系统探究HBx蛋白在诱导卵圆细胞向肝癌干细胞转化中的作用及其分子机制，为乙肝病毒相关性肝癌的发病机制提供新的解释，从而为寻找更有效的肝癌防治靶点提供理论支持。

本研究构建了表达乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）的慢病毒载体和对应的对照空慢病毒载体，分别转染WB-F344卵圆细胞，成功构建了稳定表达HBx的WB-F344卵圆细胞WB-F344-HBx和阴性对照WB-F344卵圆细胞WB-F344-PM，未进行慢病毒转染的WB-F344卵圆细胞作为空白对照WB-F344-Mock。.研究发现，与空白对照组WB-F344-Mock相比，实验组WB-F344-HBx G1/S细胞周期进程加快，细胞增殖能力增强，具有更强的细胞迁移能力和体外成瘤能力；而阴性对照组WB-F344-PM与空白对照组WB-F344-Mock相比，细胞周期、细胞增殖能力、细胞迁移能力和体外成瘤能力无显著变化。乙型肝炎病毒X蛋白可诱导卵圆细胞恶性转化。.研究发现，与空白对照组WB-F344-Mock和阴性对照组WB-F344-PM相比，实验组WB-F344-HBx细胞C-myc表达明显增强，使用特异性siRNA抑制各组细胞C-myc的表达后，各组细胞在细胞周期、细胞增殖能力、细胞成球能力无显著差异。乙型肝炎病毒X蛋白可能通过上调C-myc的表达来诱导卵圆细胞恶性转化。