上皮间质转化关键转录因子Twist介导胰腺癌放射抵抗的机制研究

胰腺癌是预后最差的恶性肿瘤之一，影响胰腺癌放射治疗效果的关键在于肿瘤细胞对照射的不敏感和耐受性问题，Twist作为EMT的关键调控因子，可能参与了这一过程。我们前期观察到照射可诱导胰腺癌细胞发生EMT，并伴有Twist表达显著增高，放射敏感性最差的Capan-1系的Twist表达明显高于其它细胞系。本研究以125I籽源短时低剂量率照射作为干预手段，探讨放射引起人胰腺癌细胞株Twist表达与放射抵抗的关系，阐明调控（干扰及过表达）Twist的表达，对胰腺癌细胞株放射敏感性的影响。构建裸鼠胰腺癌原位移植瘤模型，瘤体内植入125I粒子，在体内验证干扰Twist表达，能否显著提高胰腺癌的放射疗效。深入探讨EMT关键转录因子Twist介导胰腺癌放射抵抗的机制，为解释并评估胰腺癌患者放射疗效，提高胰腺癌的放射治疗效果提供实验基础及依据，指导临床工作。

胰腺癌是预后最差的恶性肿瘤之一，胰腺癌对多数抗肿瘤治疗如化疗、放疗和免疫治疗不敏感是导致其预后恶劣的原因之一。Twist作为EMT的关键调控因子，可能参与了这一过程。然而，Twist 在胰腺癌的发生发展以及放疗抵抗中的作用尚缺乏深入的研究，其分子调控机制尚不十分清楚。因此，本研究通过建立体外及体内的放射干预、治疗模型，探讨Twist在125I放射性粒子低剂量率照射诱导胰腺癌放射抵抗中的作用并探讨其机制。.分别从基因和蛋白水平检测 Aspc-1、SW1990、Panc-1 及 Capan-2 等 4 种胰腺癌细胞株中 Twist 的表达情况，给予 4Gy 短时低剂量率的照射后，可见各胰腺癌细胞发生了不同程度的 EMT 现象，Twist、E-cadherin 及其相关基因表达量在胰腺癌 Panc-1 细胞株照射前后的差异有统计学意义。提示Twist 通过抑制E-cadherin 的表达，促使胰腺癌细胞发生 EMT 现象，参与低剂量率照射诱导的放射抵抗。采用原位注射法建立人胰腺癌细胞裸鼠原位移植瘤模型，用超声内镜高频探头监测瘤体生长规律，植入125I放射性粒子后肿瘤体积较对照组缩小；免疫组化、Western均显示，粒子瘤体内植入前后，Twist及E-cadherin的表达量变化均有统计学意义。提示短时低剂量率照射同时可以诱导肿瘤细胞发生 EMT 现象，Twist 在这一过程中发挥了一定的作用。根据目的基因Twist信息，成功构建了高效干扰 Twist 表达的慢病毒载体，为后续实验的进行奠定了基础。用包装好的慢病毒载体感染胰腺癌细胞 Panc-1后，用嘌呤霉素筛选得到稳定表达的细胞株；照射诱导后检测细胞凋亡率的变化情况，并通过细胞迁移和侵袭实验观察 Panc-1细胞运动和侵袭能力的变化。研究证实Twist 是短时低剂量率照射诱导胰腺癌放射抵抗发生过程中的关键分子，其可能通过抑制凋亡来参与了胰腺癌细胞放射抵抗。.本研究以125I籽源短时低剂量率照射作为干预手段，探讨放射引起人胰腺癌细胞株Twist表达与放射抵抗的关系，阐明干扰Twist的表达，对胰腺癌细胞株放射敏感性的影响，深入探讨EMT关键转录因子Twist介导胰腺癌放射抵抗的机制。该课题已按照计划书内容完成相关研究工作，目前发表SCI论文2篇，发表中文核心期刊综述2篇，出版专著一本，培养博士研究生1名。