Twist2介导的上皮间质转化在胰腺癌干细胞产生中的作用

胰腺癌是消化系统恶性程度最高的肿瘤之一。目前肿瘤干细胞(CSC)理论认为肿瘤生长的维持、化疗耐药的出现、以及转移的产生都是依赖肿瘤干细胞的存在,对胰腺癌干细胞的研究有望为胰腺癌治疗提供新思路。有假说认为分化肿瘤细胞可以重新获得干细胞的特性而成为肿瘤干细胞，而上皮间质转化(EMT)在此过程中起重要作用。本研究在我们前期对胰腺癌干细胞表面标记物鉴定及其特性研究的基础上，利用已证实的含肿瘤干细胞比例以及EMT相关蛋白表达具有显著差异的两种胰腺癌细胞株BxPc-3和MIA-PaCa2，观察上皮性钙粘附蛋白（E-cadherin）阻遏因子Twist2转染或沉默对两细胞株上皮间质转化及肿瘤干细胞特性的影响，并研究相关信号通路的改变，期望能阐明上皮间质转化与胰腺癌干细胞生成之间的联系，并发现在此过程中起重要作用的信号通路，为将来以Twist2作为靶基因开展针对胰腺癌干细胞的特异治疗提供理论支持。

本项目在研究中经过对胰腺癌细胞株上皮—间质转化（EMT）调控因子的检测，将研究目的基因由Twist2调整为Snail。两者同为EMT相关转录抑制因子，但Twist2在胰腺癌标本和多个胰腺癌细胞株无表达或低表达，而Snail在胰腺癌普遍表达，更具有研究意义。研究重点探讨Snail的表达与胰腺癌肿瘤干细胞表面标记表达、侵袭能力、自我更新能力、克隆形成能力以及动物成瘤能力的相关性，从而研究EMT在胰腺癌肿瘤干细胞形成中的作用。研究发现采用慢病毒介导的shRNA 沉默Snail后降低了Panc-1 细胞的侵袭能力，增加了E-cadherin的表达以及其从细胞核向细胞膜的转移；沉默Snail还抑制了干细胞表面标记ALDH的表达，同时减少了细胞球及克隆形成的能力，并降低了干细胞相关转录因子Sox2及Oct4的表达。在动物实验发现，Snail沉默导致裸鼠成瘤能力和成瘤大小及速度的下降，并且肿瘤免疫组化显示所形成肿瘤细胞膜E-cadherin表达增加而Oct4表达降低。研究认为Snail在维持胰腺癌干细胞性状中起到重要作用，针对Snail靶向治疗可能是胰腺癌治疗的途径。