miR-155参与调控白癜风NKT细胞功能异常及机制研究

白癜风是一种多发难治自身免疫性疾病，课题组前期发现进展期白癜风患者外周血自然杀伤性T细胞（NKT）数目减少、功能低下，提示NKT缺陷引起免疫失衡在白癜风发病中发挥重要作用，但引起NKT缺陷具体机制不明。申请者研究发现白癜风NKT细胞miR-155异常高表达，miR-155 KI转基因小鼠NKT细胞数目减少、功能低下，提示NKT细胞miR-155病理性升高引起NKT缺陷可能是导致白癜风免疫失衡的主要因素。通过生物学预测我们发现调控NKT的重要激酶Itk可能是miR-155靶基因。本项目拟应用α-GalCer四聚体，结合流式细胞术等方法阐明白癜风患者NKT细胞缺陷及miR-155表达水平与疾病的相关性，利用3'UTR报告系统等方法证实Itk为miR-155靶基因，进而阐明病理性高表达miR-155调控NKT细胞数目、功能的具体分子机制，为白癜风临床免疫治疗提供理论支持和新的策略。

自然杀伤性T细胞（Nature killer T cell，NKT）为重要免疫效应及免疫调节细胞，通过短时间内快速分泌大量Th1类及Th2类细胞因子，发挥重要的免疫调节功能，维持机体Th1/Th2免疫稳态，许多自身免疫性疾病的发生、发展都有NKT细胞功能异常有关。但关于白癜风发病中NKT细胞的异常状态，目前未有相关报道。本项目使用装载α-GalCer的CD1d四聚体（α-GalCer-CD1d tetramers）标记人NKT细胞，通过流式细胞术等方法发现进展期白癜风患者外周血中NKT细胞比率降低，分泌细胞因子功能障碍，白癜风患者NKT细胞分泌IL-4水平较正常对照降低（P＜0.05），表明白癜风患者NKT细胞数目及功能低下，可能参与了机体自身免疫状态的失衡，促进了白癜风的发生发展。为进一步探究白癜风患者NKT细胞缺陷的机制，结合课题组前期发现，本项目发现白癜风患者外周血NKT细胞异常高表达miR-155，并通过干涉/过表达miR-155，进一步证实miR-155对NKT细胞细胞因子分泌功能的影响。通过生物信息学方法，预测出IL-2诱导的T细胞激酶（Itk）可能为miR-155调控NKT细胞功能的重要靶基因，并在NKT细胞中的观察发现miR-155与Itk表达存在负相关性，进一步3’UTR报告系统、补救实验等方法证实Itk为miR-155调控NKT细胞的靶基因。该项目研究证实白癜风患者NKT细胞miR-155病理性升高，通过转录后调控抑制靶基因Itk的表达。从而引起NKT细胞功能缺陷，导致机体自身免疫失衡、白癜风快速发展，为白癜风临床免疫治疗提供新策略。