新疆圆柏抗类风湿性关节炎有效成分及其作用机制研究

柏科圆柏属植物新疆圆柏具有祛风镇静，活血止痛之功效，在民间被用于类风湿性关节炎（RA）等疾病的治疗。本课题组前期研究发现该植物的不同极性提取物均具有较强的抗炎镇痛活性，其中乙酸乙酯提取部位还对大鼠佐剂性关节炎显示了明显的治疗作用。RA病理机制复杂、靶点众多。针对这一特点，项目组拟采用超临界流体萃取、大孔树脂等技术富集有效组分，利用硅胶、反相硅胶和Sephadex LH-20 等色谱技术分离和纯化有效组分中的有效成分，通过MS、NMR和X-ray 等波谱手段鉴定结构；再结合体外炎症介质和炎性细胞因子影响实验以及整体动物实验多层次、多靶点研究新疆圆柏抗RA有效成分，揭示其物质基础，并从整体、器官、细胞和分子水平阐明其抗RA作用及作用机制；为进一步创新药物的研发提供理论依据。

柏科圆柏属植物新疆圆柏Juniperus sabina具有祛风镇静，活血止痛之功效，在民间被用于类风湿性关节炎（RA）等疾病的治疗。项目组通过体外生物活性筛选试验结合现代色谱技术研究了新疆圆柏中具有显著抗炎作用的有效部位有效成分。结果从新疆圆柏中分离纯化得到29个化合物，其中2个为新的黄酮苷类化合物，并且进一步发现有效部位圆柏总黄酮及其标识性成分槲皮苷等成分对COX-2/5-LO均有较好的抑制作用，并对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW246.7释放的炎症介质及炎症因子有一定的抑制作用。在化学成分研究基础上，通过正交试验设计建立了新疆圆柏总黄酮（JSTF）的大孔树脂吸附纯化工艺。进一步利用大鼠佐剂性关节炎模型，并根据临床上病人接受治疗时间不同以及RA的疾病特点，对JSTF进行了各个实验阶段的实验研究，结果表明JSTF对AA大鼠模型在急性期、继发期预防和治疗阶段均有较好的改善作用，在继发期治疗实验中JSTF的抗炎作用接近于阳性药物雷公藤多苷，其抗炎作用的可能机制是：降低炎症介质PGE2和促炎细胞因子（IL-1beta、IL-6、TNF-alpha）水平，下调NF-κBp65、VEGF、 MMP-3、 ICAM-1和 caspase-3蛋白的表达。此外，项目组还研究发现新疆圆柏抗炎有效成分芦丁对大鼠佐剂性关节炎有较好的防治作用。综上所述，项目组以现代色谱技术结合体外炎症介质和炎性细胞因子影响实验以及整体动物实验按计划多层次、多靶点地研究新疆圆柏抗RA有效部位有效成分，揭示了其发挥药效的物质基础，并阐明了其抗RA的作用及作用机制；研究结果可为民族药新疆圆柏的深入开发以及创新药物的研制提供理论数据。