铁棒锤治疗类风湿性关节炎有效成分及T细胞调控作用机制研究

铁棒锤治疗类风湿性关节炎在宁夏民间广泛应用，但该药治病的物质基础及作用机制的研究却处于起步阶段，尤其是生物碱类成分较强的毒性限制了该药的深入研发。在本项目的前期工作中，我们首次找到了铁棒锤对类风湿性关节炎有较强治疗作用的非生物碱有效部位（克服了该药的毒性），在此基础上,本项目拟采用现代分离方法和技术手段对该有效部位治疗类风湿性关节炎的有效成分及构效关系进行深入研究，结合1D、2D-NMR波谱学测试技术及HR-ESI-MS等，分别确（鉴）定单体化合物的化学结构。同时因T细胞在类风湿性关节炎的发病中处于中心性地位，本实验拟以T细胞为靶点，通过对T细胞活化、分化、增殖等调控作用的研究，探讨铁棒锤非生物碱有效成分治疗类风湿性关节炎的作用机制，为将其研发成注册分类1或5类新药提供实验依据。

一铁棒锤治疗类风湿性关节炎有效成分的分离和结构鉴定.1.完成了铁棒锤治疗类风湿性关节炎的非生物碱活性部位的富集，主要采用大孔吸附树脂技术结合阳离子交换树脂及时。.2.从有效部位中分离并鉴定了32种非生物碱单体化合物，分别是D-葡萄糖1α→2βD-果糖，蒙花苷，β-谷甾醇， β-胡萝卜苷，3,5,6-三羟基-β-谷甾醇，邻苯二甲酸二-(2-乙基)-己基酯，(2E)-3-[4-(β-D-吡喃葡萄糖苷)-苯基]-丙烯酸，十五碳酸，5-羟甲基糠醛，3,4-二羟基苯甲酸，尿嘧啶，乌头酸，阿魏酸甲酯，反式阿魏酸，β-乌头酸甲酯，尿苷，1 ' 2 ' 3 ' -乌头酸甲酯，1' -乌头酸甲酯，1 ' 3 ' -乌头酸甲酯，1’2’-乌头酸甲酯，2’3’ -乌头酸甲酯，反-乌头酸三甲酯，衣康酸二甲酯，2-羟基-3-苯基丙酸甲酯，α-甲基葡萄糖苷，1,2,3-丙烷三羧酸三甲酯，柠檬酸三甲酯，邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯，D-酪氨酸，四氢-5-氧代-2-呋喃羧酸，(S)-(+)-柠苹酸，DL-苹果酸二甲酯。.二、铁棒锤治疗类风湿性关节炎有效成分的确认研究.1.通过T细胞活化、增殖实验筛选了铁棒锤治疗类风湿性关节炎的有效部位及有效成分，分别为非生物碱活性部位以及邻苯二甲酸二-(2-乙基)-己基酯（抑制细胞增殖）、(2E)-3-[4-(β-D-吡喃葡萄糖苷)-苯基]-丙烯酸（抑制细胞增殖、分化）、蒙花苷（抑制细胞的增殖、分化）、5-羟甲基糠醛（抑制细胞的增殖）等单体化合物。.2.根据分离获得的有效成分的量，进一步对非生物碱活性部位及单体化合物蒙花苷进一步进行药理实验研究。研究结果是伏毛铁棒锤非生物碱部位和有效成分蒙花苷可以通过干预炎症相关炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6）和减少VEGF和MMP-3蛋白表达降低佐剂性关节炎大鼠关节炎的发展。.三、铁棒锤治疗类风湿性关节炎有效成分的构效关系研究.对蒙花苷水解产物苷元与蒙花苷进行了对比研究，结果证实蒙花苷发挥治疗作用与其糖链结构有关。含糖链的结构有活性，没有糖链结构的没有活性。.四、铁棒锤治疗类风湿性关节炎有效成分作用机理研究.1.蒙花苷高剂量组对PDB刺激的T细胞CD69的表达有较强的抑制作用。.2. 蒙花苷在一定浓度下对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用。.3. 蒙花苷高中低剂量组阻断细胞在G1期